[發明專利]DNA過氧化物模擬酶在檢測1;8-二氨基萘中的應用有效
| 申請號： | 201710214463.1 | 申請日： | 2017-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN106841080B | 公開（公告）日： | 2019-11-01 |
| 發明（設計）人： | 梁剛;滿燕;李安;靳欣欣;潘立剛 | 申請（專利權）人： | 北京農業質量標準與檢測技術研究中心 |
| 主分類號： | G01N21/33 | 分類號： | G01N21/33 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100097 北京市海淀區曙光*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | dna 過氧化物 模擬 檢測 氨基 中的 應用 | ||
1.一種應用DNA過氧化物模擬酶進行1,8-二氨基萘檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將DNA過氧化物模擬酶與ABTS溶液混合均勻；
所述DNA過氧化物模擬酶中DNA的序列為PW17,Tel22,T30695，PS2.M2所示的序列中的一種；
所述DNA過氧化物模擬酶通過以下方法制備：
S1：將DNA用緩沖溶液溶解，用漩渦振蕩器混勻，并于85-95℃的水浴中處理1-10min，取出，自然冷卻，靜置于室溫下0.1-5h，備用；
S2：取步驟S1配制的DNA溶液加到離心管中，向其中加入Tris-KClO4溶液，孵育0.1-5h后，加入hemin，用漩渦振蕩器混勻，放置0.1-10h，得到DNA過氧化物模擬酶；
(2)將含1,8-二氨基萘的待測樣品用緩沖溶液稀釋，然后與H2O2溶液混合均勻；
(3)將步驟(1)所得的混合溶液置于離心管中，取步驟(2)所得的混合溶液快速加入上述離心管，得到比色檢測體系，待3-6min后進行紫外-可見吸收信號檢測；
所述比色檢測體系的pH值為7-8，所述緩沖溶液由Tris、KClO4配制而得；
用波長422nm處的紫外-可見吸收信號構建標準曲線。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的DNA過氧化物模擬酶中DNA與hemin的濃度比為1：1.0-1.5。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述比色檢測體系中：DNA過氧化物模擬酶的濃度為10-500nM，ABTS濃度為0.1-5mM，H2O2溶液的濃度為0.1-10mM，K+的濃度為1-50mM。
4.根據權利要求1～3任意一項所述的方法，其特征在于，利用標準梯度濃度的1,8-二氨基萘制備混和比色檢測體系，進行紫外-可見吸收信號檢測，構建標準曲線，將待測樣品的檢測值帶入計算，對待測樣品的1,8-二氨基萘污染物進行定量分析。
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