[發明專利]一種定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法

在審

• 申請號: 201710214233.5
• 申請日: 2017-04-01
• 公開（公告）號: CN107102146A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 胡琴;馬云蘇;許貫虹;魏芳弟;岑瑤
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/533
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 曹翠珍

1.一種定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，步驟如下：

(1)、制備蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂連接抗體Ab1的復合物PA/G-Ab1；

(2)、制備碳點標記熒光探針CDs-Ab2：以檸檬酸為碳源，二乙烯三胺修飾合成碳點，將CDs在EDC、NHS的作用下，與多克隆抗體Ab2通過酰胺鍵共價結合，形成CDs-Ab2；

(3)、將步驟(1)所得PA/G-Ab1與血清內的GFAP特異性反應，將其從復雜基質中分離富集，形成PA/G-Ab1-GFAP；

(4)、將PA/G-Ab1-GFAP與CDs-Ab2相結合形成夾心結構PA/G-Ab1-GFAP-Ab2-CDs，用PBS溶液清洗至上清液無熒光后測試熒光強度，根據標準曲線，得到血清中GFAP的含量。

2.根據權利要求1所述的定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，其特征在于：步驟(1)中，取蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂與Ab1結合后借助BSA封閉抗體上非特異性位點，且用結合緩沖液清洗，去除未反應的Ab1和雜質，冷藏備用。

3.根據權利要求2所述的定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，其特征在于結合緩沖液的組分為0.15M NaCl、20mM Na₂HPO₄，pH為7.0。

4.根據權利要求1所述的定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，其特征在于：步驟(1)中所述蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂與Ab1體積比為1:5，Ab1為鼠抗人GFAP單克隆抗體，濃度為20μg/mL。

5.根據權利要求1所述的定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，其特征在于步驟(3)中PA/G-Ab1與測樣血清體積比為1:10。

6.根據權利要求1所述的定量檢測血清中神經膠質纖維酸性蛋白的方法，其特征在于：步驟(2)中CDs與Ab2質量濃度比為15:1。