[發明專利]抗B型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體、其用途以及分泌所述單克隆抗體的雜交瘤細胞

有效

• 申請號: 201710213149.1
• 申請日: 2017-04-01
• 公開（公告）號: CN107012127B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 黃家菊;王磊;何濤;舒川;龍騰鑲
• 申請（專利權）人: 四川邁克生物新材料技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/577;G01N33/576;G01N33/569;C12R1/91
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本發明涉及抗B型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體、其用途以及分泌所述單克隆抗體的雜交瘤細胞。本發明還涉及所述單克隆抗體用于制備檢測樣品中B型肝炎病毒核心抗體的試劑的用途，包含所述單克隆抗體的檢測試紙條。本發明的單克隆抗體特異性強、靈敏度高、穩定性好，可用于快速、準確地檢驗樣品中的B型肝炎病毒核心抗體。

技術領域

本發明涉及抗B型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體，分泌所述單克隆抗體的雜交瘤細胞，以及所述單克隆抗體在B型肝炎病毒核心抗體檢測中的用途。

背景技術

B型肝炎病毒(Hepatitis virus B，HBV)屬DNA病毒，是一種嗜肝病毒，為有包膜的部分雙鏈環狀DNA病毒。B型病毒性肝炎的傳染方式主要通過輸血、注射和母嬰傳播。B型肝炎病毒(HBV)感染是世界性的難題，全球范圍內慢性感染者多達4億，發展中國家是B型肝炎的重災區。B型肝炎通常會造成慢性感染，可進展為肝硬化乃至肝細胞癌，對人類健康有巨大的威脅。

共價閉合環狀脫氧核糖核酸(covalenfly closed circular DNA即 cccDNA)是B型肝炎病毒(HBV)復制中的重要環節，是mRNA和前基因組 RNA的合成模板，也是HBV難以治愈的關鍵因素，其長期存在與B型肝炎的慢性化以及抗病毒治療后復發有著重要關系。故做好cccDNA的檢測工作對于了解患者病情變化、評估治療效果有著十分重要的意義。但肝組織內cccDNA的檢測需要做肝組織活檢，患者往往難以接受，所以尋找一種操作方便，靈敏度高的血清學標志很有必要。

隨著對B型肝炎病毒血清標志物研究的深入，人們認識到了檢測血清中B型肝炎病毒核心抗體(Hepatitis B core Antibody即HBcAb)在HBV感染的監測及治療中所具有的重要臨床意義。乙肝核心抗體(HBcAb)是乙肝病毒核心抗原的對應抗體，它不是保護性抗體，它的存在反而是受到乙肝病毒侵害的指標之一。HBcAb的存在可作為乙肝傳染性活動性病變的標志，同時有助于乙肝病情和預后的判斷。

但是，現有的HBcAb檢測方法主要是化學發光微粒子免疫檢測法 (CMIA)、酶聯免疫競爭抑制一步法(ELISA)和膠體金法。無論使用何種檢測方法，其檢測結果的優劣與測定中所使用的單克隆抗體的靈敏度、特異性和穩定性密切相關。因此，為了獲得更好的HBcAb檢測方法，尋找靈敏度、特異性與穩定性俱佳的HBcAg單克隆抗體成為人們一直追求的目標。另外，由于檢測試劑、試紙條的保存條件有時并不能盡如人意，所以人們通常希望檢測試劑與試紙條在經過惡劣的環境變化后還能保持高度的穩定性與可信度。

發明內容

本發明制備了特異性強、靈敏度高、穩定性好的抗B型肝炎病毒核心抗原單克隆抗體，以及分泌所述抗體的雜交瘤細胞。

本發明采用經典的雜交瘤單克隆抗體技術。以四川邁克生物新材料技術有限公司自產的重組HBcAg批號(150827)免疫2只Balb/C小鼠，用血清篩選后選取抗體效價較好的小鼠用于細胞融合，融合后經有限稀釋法篩選出1株能穩定分泌抗體的雜交瘤細胞株(12E4)，該細胞株以保藏號 CCTCC NO：C201747保藏于中國典型培養物保藏中心。發明人繼而制備純化后的抗體，經間接ELISA檢測其效價，使用上海科華生物工程股份有限公司B型肝炎病毒核心抗體檢測試劑盒檢測活性，并制備成檢測試劑盒檢測臨床樣本，經過反復凍融及熱加速處理后繼續制備成檢測試劑盒檢測臨床樣本，證實了我們制備的可分泌抗B型肝炎病毒核心抗原單克隆抗體的雜交瘤細胞所分泌的單克隆抗體能與目的蛋白發生特異性的結合，該高效價、高靈敏度、高特異性、高穩定性的單克隆抗體能在膠體金平臺(競爭抑制法)準確快速地檢測血清中HBcAb。

附圖說明

圖1展示了本發明的單克隆抗體A與兩種商業化抗B型肝炎病毒核心抗原單克隆抗體B與C的抗體效價檢測的結果。以LOG(稀釋度)作為橫坐標，抗體OD值作為縱坐標。