[發(fā)明專利]一種ASE?HPLC法測(cè)定紫蘇子中迷迭香含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710211996.4
• 申請(qǐng)日: 2017-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN107091888A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖強(qiáng);王麗麗;歐妮;韋日偉;陳學(xué)松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙)44295
• 代理人: 黃為

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是一種ASE-HPLC法測(cè)定紫蘇子中含量的方法。

背景技術(shù)

2015年藥典記錄了提取紫蘇子中迷迭香酸的方法：取本品粉末(過二號(hào)篩)約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

其液相色譜的參數(shù)為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75：25)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為289nm。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

藥典的方法操作過程復(fù)雜，對(duì)操作人員的操作技能要求高。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述不足，本發(fā)明旨在提供一種ASE法對(duì)樣品進(jìn)行萃取與HPLC法對(duì)樣品中迷迭香酸的含量進(jìn)行測(cè)定的方法進(jìn)行結(jié)合，從而達(dá)到操作簡(jiǎn)單，萃取時(shí)間短，萃取徹底且檢測(cè)精度高的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ASE-HPLC法測(cè)定紫蘇子中迷迭香酸含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法用甲醇對(duì)粉碎后的紫蘇子樣品進(jìn)行萃取，并收集甲醇萃取液；

步驟2：采用HPLC法對(duì)甲醇萃取液中的迷迭香酸進(jìn)行含量測(cè)定。

進(jìn)一步的，所述的步驟1包括下述子步驟：

步驟S1：將樣品粉碎，過二號(hào)篩，取0.5g與0.3g硅藻土混合；

步驟S2：將步驟1所得的混合物裝于放有濾膜的5ml ASE萃取池中，并加硅藻土至與池口平行；

步驟S3：用50ml甲醇萃取，并在萃取結(jié)束后用甲醇定容至50ml，得粗萃取液；

步驟S4：將粗提取液在15000r/min下離心5min，取上清液，得甲醇萃取液。

進(jìn)一步的，步驟S3所述的萃取參數(shù)為：萃取溶劑為80％甲醇，萃取溫度為100℃，萃取時(shí)間為5min，萃取次數(shù)為3次，沖洗體積為100％，吹掃時(shí)間為100s。

進(jìn)一步的，步驟2所述的HPLC法的檢測(cè)參數(shù)為：色譜柱為ASE Excel 2C18-AR，2.1*75mm，3μm；流速為0.3mL/min；流動(dòng)相為甲醇-0.1％甲酸；檢測(cè)波長為330nm。

進(jìn)一步的，所述的流動(dòng)相的甲醇-0.1％甲酸的體積比為40:60。

進(jìn)一步的，所述的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

進(jìn)一步的，理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

進(jìn)一步的，所述的ASE法所采用的儀器為美國DIONEX公司的ASE350快速溶劑萃取儀；HPLC法所采用的儀器為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。

本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明提高了溫度降低溶劑的黏度，減少了溶劑進(jìn)入樣品基體的阻止，增加了溶劑進(jìn)入樣品基體的擴(kuò)散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測(cè)物的容量增加；

2.由于液體對(duì)溶質(zhì)的溶解能力遠(yuǎn)大于氣體對(duì)溶質(zhì)的溶解能力，故萃取液體的沸點(diǎn)隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)；

3.采用本發(fā)明所述的HPLC法對(duì)本發(fā)明所述的ASE萃取的甲醇萃取液，得迷迭香酸在2.717～54.34ng圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；

4.本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明所述的ASE提取方法重復(fù)性良好；

5.本發(fā)明采用4因素3水平正交試驗(yàn)考察了對(duì)提取效率影響較大的4個(gè)因素：萃取溫度、靜態(tài)萃取時(shí)間、循環(huán)次數(shù)，通過實(shí)驗(yàn)，并由極差分析可以看出，提取溶劑對(duì)迷迭香酸的含量影響最大，其次是萃取溫度、循環(huán)次數(shù)和靜態(tài)萃取時(shí)間；

最終確定較佳ASE參數(shù)為萃取溫度100℃，靜態(tài)萃取時(shí)間5min，循環(huán)提取3次。

附圖說明

圖1為柚皮苷以濃度(ng)-峰面積進(jìn)行線性回歸圖；

圖2為藥典方法測(cè)定迷迭香酸對(duì)照品的色譜圖；

圖3為藥典方法測(cè)定紫蘇子中柚皮苷含量的色譜圖；

圖4為ASE-HPLC法測(cè)定迷迭香酸對(duì)照品的色譜圖；

圖5為ASE-HPLC法測(cè)定紫蘇子中柚皮苷含量的色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求書做進(jìn)一步說明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任何對(duì)本發(fā)明做有限次修改所得的技術(shù)方案，仍然屬于本發(fā)明所要保護(hù)的范圍。

1.儀器設(shè)備及試劑

1.1儀器：