[發(fā)明專利]冰片中微生物限度檢查方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710207297.2
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN106868093A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅達(dá)龍;黃林杰;李夷君;覃藍(lán);陳學(xué)松
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12Q1/06
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙)44295
• 代理人: 蔡國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物限度檢查方法，尤其是一種冰片中微生物限度檢查方法，屬于化學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

冰片(合成龍腦)作為藥用原料藥。根據(jù)2015年版《中國藥典》四部1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法，應(yīng)進(jìn)行需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單，方法可行的冰片中微生物限度檢查方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的：

一種冰片中微生物限度檢查方法，依次包括下述步驟：

1)菌液制備

取經(jīng)33℃培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)液及25℃培養(yǎng)24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)液，用0.9％無菌氯化鈉溶液制成含菌數(shù)為1000～10000cfu/ml的菌懸液，備用；取經(jīng)25℃培養(yǎng)7天的黑曲霉沙氏葡萄糖瓊脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，用帶有棉花的球形吸管吸出孢子懸液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液制成含孢子數(shù)為1000～10000cfu/ml的孢子懸液，備用；

2)供試液制備

取本品10g，加入10ml十四烷酸異丙酯，再加入預(yù)熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至100ml，45℃氣浴振搖10min，混勻，靜置取上清液作為1:10供試液；

4)方法建立及回收率試驗(yàn)

采用中和法和稀釋法進(jìn)行冰片的非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查中需氧菌總數(shù)檢查；采用中和法進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)檢查。

進(jìn)一步的，上述的一種冰片中微生物限度檢查方法，所述的中和法依次包括下述步驟：

試驗(yàn)組：吸取1:10供試液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗(yàn)菌懸液，搖勻，分別從試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；另從真菌試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿；

菌液對照組：吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗(yàn)菌懸液，搖勻，分別從試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿；

中和劑對照組：吸取10ml十四烷酸異丙酯，加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗(yàn)菌懸液，搖勻，分別從試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿；

供試品組：吸取1:10供試液1ml至平皿，平行制備4個(gè)平皿，其中2個(gè)傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，另外2個(gè)傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；

稀釋劑組：吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基1ml至平皿，平行制備4個(gè)平皿，其中2個(gè)傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，另外2個(gè)傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；

中和劑組：吸取10ml十四烷酸異丙酯，加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基1ml至平皿，平行制備4個(gè)平皿，其中2個(gè)傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，另外2個(gè)傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；

各平皿傾注規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)3－5d，測定需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)，計(jì)算其回收率，其計(jì)算公式為：

進(jìn)一步的，上述的一種冰片中微生物限度檢查方法，所述的中和法和稀釋法依次包括下述步驟：

供試液制備

取本品10g，加入10ml十四烷酸異丙酯，再加入預(yù)熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至100ml，45℃氣浴振搖10min，混勻，靜置取上清液作為1:10供試液；吸取1:10供試液40ml加入40ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，搖勻制成1:20供試液；

中和法和稀釋法：

試驗(yàn)組：吸取1:20供試液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗(yàn)菌懸液，搖勻，分別從試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；

菌液對照組：吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗(yàn)菌懸液，搖勻，分別從試驗(yàn)菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；