[發明專利]一種受低溫和脫落酸誘導的啟動子S6PDHp3及其應用

在審

• 申請號: 201710206949.0
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN107119049A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發明（設計）人: 梁東;夏惠;呂秀蘭;鄧群仙;王進;林立金
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 成都玖和知識產權代理事務所(普通合伙)51238
• 代理人: 黎祖琴

技術領域

本發明屬于植物基因工程技術領域，具體涉及一種受低溫和脫落酸誘導的啟動子S6PDHp3及其應用。

背景技術

啟動子對于一個基因的表達具有非常重要的調控作用。Qi等(2007)認為大豆PvSR2基因啟動子的(-222/-188)區和(-187/-147)區是重金屬脅迫響應的關鍵區域。Xu等(2010)發現葡萄芪合成酶基因啟動子的(-162/0)區對脅迫誘導最為關鍵。Li等(2013)的結果也表明GPP基因啟動子受不同逆境的誘導。

在植物抗逆啟動子方面，現有技術進行了富有成效的研究，如中國農業科學院棉花研究所所持的中國專利201310450331.0提供了一種干旱脅迫誘導的啟動子。不過，目前，在低溫和脫落酸誘導啟動子方面的研究還相對較少。

因此，構建一種受低溫和脫落酸誘導的啟動子是十分必要的。

發明內容

針對現有技術的缺點，本發明的目的之一在于提供一種受低溫和脫落酸誘導的啟動子，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明的另一個目的在于提供包含上述啟動子的表達載體。本發明所述的表達載體可以為任何一種可包含本發明所述啟動子的表達載體，如pGWB433表達載體。

在實際利用時，舉例而言，本發明所述的表達載體可以用于表達GUS基因。

本發明的另一個目的在于提供包含上述啟動子的重組菌或表達盒。

本發明的所述的表達盒由所述啟動子、所述啟動子轉錄的目的基因和終止子構成。

本發明的另一個目的在于提供利用所述啟動子培育轉基因植物的方法，該方法包括：構建含所述啟動子的表達載體并轉化入植物中，得到受低溫和脫落酸誘導表達的轉基因植物。

舉例而言，本發明所述的植物可以為薔薇科植物(山梨醇(Sorbitol)是其糖代謝的主要形式)。

如本發明的實施例所示，所述植物可以為擬南芥。

本發明的有益效果：

本發明的啟動子可以顯著的提高外源基因在低溫脅迫和脫落酸脅迫下的表達水平，可將其用于提高和改善植物在逆境脅迫下的生長特性和環境適應性。

附圖說明

圖1為本發明S6PDHp3::GUS融合表達載體的PCR檢測；

圖2為本發明所得轉基因擬南芥的PCR檢測；

圖3為本發明轉基因擬南芥不同部位GUS染色結果圖；其中，A：葉；B：莖；C：花；D：根；

圖4為本發明實施例1低溫處理下轉基因擬南芥中GUS活性分析；其中，GUS活性平均值源自3次獨立試驗；標準差標于柱型圖上；單側配對t檢驗用于顯著性差異檢測分析(*：P<0.05)；WT：野生型；

圖5為本發明實施例1ABA處理下轉基因擬南芥中GUS活性分析；GUS活性平均值源自3次獨立試驗；標準差標于柱型圖上；單側配對t檢驗用于顯著性差異檢測分析(**：P<0.01)；WT：野生型；

圖6為本發明是實施例1和對比實施例1～3低溫處理下轉基因擬南芥中進行低溫誘導時的GUS活性分析；GUS活性平均值源自3次獨立試驗；標準差標于柱型圖上；單側配對t檢驗用于顯著性差異檢測分析(**：P<0.01)；WT：野生型。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明進行具體描述，有必要在此指出的是以下實施例只是用于對本發明進行進一步的說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技術熟練人員根據上述發明內容所做出的一些非本質的改進和調整，仍屬于本發明的保護范圍。

實施例1

1.1材料

本研究所用的擬南芥(Arabidopsis thaliana)為Columbia野生型。MUG、SDS、Tris酚、X-gal、4-MU購自Sigma公司，BP Clonase Enzyme Mix和LR Clonase Enzyme Mix均購自Invitrogen公司，其它試劑均為國產分析純。載體pDONR221(Kan抗性)、pGWB433、農桿菌EHA105和含有蘋果S6PDHp基因的載體(pMD-S6PDHp)為本實驗室保存。大腸桿菌TOP10感受態購買于天根公司。

1.2 S6PDHp3::GUS融合表達載體的構建