[發明專利]一種促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑

在審

• 申請號: 201710205309.8
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN107058179A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 周文兵;肖雪;朱端衛;蔡建波;肖乃東
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F15/00;C05F17/00;C12R1/01;C12R1/07
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙)42231
• 代理人: 黃君軍

1.一種促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑，其特征在于：所述微生物復合菌劑是由嗜熱裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜熱球形脲芽胞桿菌(Ureibacillus thermophaericus)、成團泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏庫特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)和液體培養基制成。

2.一種如權利要求1所述的促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑的制備方法，其特征在于：將嗜熱裂孢菌(Thermobifida fusca)和嗜熱球形脲芽胞桿菌(Ureibacillus thermophaericus)分別接種于液體培養基中并于55℃下振蕩發酵培養18～24h，將成團泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏庫特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)和短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)分別接種于液體培養基中并于35℃下振蕩發酵培養18～24h，將該6株菌株的發酵液按體積比1:1:1:1:1:1的比例均勻混合，即制成促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑。

3.如權利要求2所述的促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑的制備方法，其特征在于：所述嗜熱裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜熱球形脲芽胞桿菌(Ureibacillus thermophaericus)、成團泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏庫特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)該6株菌株的篩選方法如下：

步驟S1：采集樣品：將豬糞和切碎的水稻秸稈混合形成堆肥，分別于堆肥升溫期的30℃、35℃、45℃，高溫期的50℃、55℃、57℃、59℃，以及開始降溫的57℃、55℃、50℃、45℃、35℃、30℃下取堆肥樣，將采集的每個樣品加入經滅菌過的試劑瓶中，同時向其中加入無菌水，于恒溫下振蕩30min，每次取樣的樣品振蕩時設定的溫度為當次樣品取樣時的堆肥溫度；

步驟S2：制備梯度濃度稀釋液：每個樣品振蕩后的懸濁液取出，作為10^-1濃度的稀釋菌懸液，吸取1mL 10^-1濃度的稀釋液于無菌試管中，加入9mL無菌水，加蓋搖勻，即得10^-2濃度的稀釋菌懸液，吸取1mL 10^-2濃度的稀釋液于無菌試管中，加入9mL無菌水，加蓋搖勻，即得10^-3濃度的稀釋菌懸液，以此重復，制備出從10^-1到10^-8的濃度梯度的稀釋菌懸液；

步驟S3：菌落培養：每個樣品分別吸取10^-5、10^-6、10^-7濃度的稀釋菌懸液，并將每個樣品的稀釋菌懸液分別置于牛肉膏蛋白胨培養基、PDA培養基和高澤氏一號培養基中，用涂布棒涂勻，并將上述培養基分別于恒溫培養箱中倒置培養，培養箱設置的溫度為該次樣品從堆肥中采集時的堆肥溫度；

步驟S4：菌落復篩：待上述培養基中長出清晰可見的菌落后，從所有的培養基中選取至少10株續代長勢良好的優勢菌種，將每株優勢菌種按5％的投加量投加至步驟S1中所述堆肥中，監測堆肥發酵過程中水溶性銨態氮的含量和水溶性硝態氮的含量變化，以堆體水溶性銨態氮質量濃度與水溶性硝態氮質量濃度的比值小于0.5作為堆肥腐熟標準，以此篩選出6株具有快速腐熟能力的有效菌株，初步鑒定該6株菌株分別為嗜熱裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜熱球形脲芽胞桿菌(Ureibacillus thermophaericus)、成團泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏庫特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)和短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)。

4.如權利要求3所述的促進豬糞堆肥發酵的微生物復合菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟S1中，將豬糞和切碎的水稻秸稈按質量比7:1混合。