[發明專利]一種體外培育生長出的透明軟骨樣塊狀組織及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710203080.4
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN106943630B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 孫勇;樊渝江;滕穎影;陳亞芳;張興棟
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;A61L27/38
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 曾曉波

1.一種體外培育生長出的透明軟骨樣塊狀組織的制備方法，其特征在于，所述方法是一種無需支架材料的高效快速的透明軟骨樣塊狀組織的體外制備方法，具體為：將軟骨細胞通過二維平面擴增，然后經過三維懸滴培養方法進行預成團培養；選擇性獲得直徑為50-300微米的軟骨細胞微團，然后將所得軟骨細胞微團轉移至低粘附的培養板中培養1-2 周，經細胞微團之間的自聚集后生成透明軟骨樣塊狀組織。

2.根據權利要求 1 所述制備方法，其特征在于，具體步驟包括：

1）將哺乳動物來源的關節透明軟骨經酶消化后分離出的軟骨細胞在體外二維平面培養擴增至P2 代后，不含EDTA 的胰酶消化制得濃度為4×10⁵cells/ml 的細胞懸浮液，然后將此細胞懸浮液接種于384 孔的懸滴培養板上，每孔接種的體積為30μl；

2）在懸滴培養板中培養一天后，通過補加50ul 磷酸鹽緩沖溶液（PBS）將細胞微團收集于50ml 離心管中，并以300×g 的離心力離心5 分鐘，然后將收集到的細胞微團以2.3×10⁶cells/孔的濃度接種于低粘附六孔板里培養；

3）每隔三天換一次液，直到培養周期兩周期滿后，收集生長出來的透明軟骨樣塊狀組織。

3.一種采用權利要求 1 所述方法體外培育生長出的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，包括細胞外基質和均勻鑲嵌在其中的軟骨細胞，所述細胞外基質含有豐富的天然軟骨成分粘多糖和二型膠原。

4.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，所述軟骨細胞呈現出球狀或者橢圓狀形態。

5.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，所述軟骨細胞處于細胞外基質構成的陷窩中。

6.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，所述軟骨細胞呈現出了柱狀排列圖案和肥大化現象。

7.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，所述透明軟骨樣塊狀組織尺寸大小為1-2cm。

8.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，在所述塊狀組織外周區域軟骨細胞呈現以細胞微團圓心為發射點的四周發射圓柱狀排列。

9.根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織，其特征在于，所述軟骨細胞通過二次自聚集互相之間連接成多孔的珊瑚樣塊狀組織。

10.一種根據權利要求 3 所述的透明軟骨樣塊狀組織的應用，其特征在于，將其用于制備軟骨組織修復材料。