[發明專利]與糖肽反應的單克隆抗體及其用途

在審

• 申請號: 201710202207.0
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN107857815A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 井口由起子;野村雄;深川耕次;江頭由里子;比嘉友紀子
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 何楊

技術領域

本發明涉及與糖肽反應的單克隆抗體及其用途。

背景技術

據稱，在由肝炎、肝硬化向肝癌發展時，生物試樣中，與小扁豆凝 集素(LCA)結合的甲胎蛋白(AFP)(LCA結合性AFP)增加。專利 文獻1記載了一種用于檢測LCA結合性AFP的抗體。據記載，專利文獻1 的抗體對結合性AFP顯示反應性，對LCA非結合性AFP不顯示反應性。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開昭63-307900號公報

發明內容

發明要解決的課題

專利文獻1中記載，LCA所結合的AFP的糖鏈中存在巖藻糖 (Fucose)。生物試樣中的與小扁豆凝集素結合的AFP級分被稱為 AFP-L3級分。AFP-L3級分由巖藻糖基化AFP(AFP的天冬酰胺殘基上 附加有核心巖藻糖(與N型糖鏈的還原末端的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc) α1-6結合的巖藻糖)的AFP)構成。

專利文獻1的實施例中獲得了與LCA結合性AFP(AFP-LCA-R) 結合、但不與LCA非結合性AFP(AFP-LCA-NR)結合的抗體(參照 實施例1、表1、圖1)。但是，該抗體的表位不明。實施例中指出，LCA 結合性和非結合性如上所述起因于巖藻糖的有無，與抗原的結合性可能 不依賴于肽部分的序列，而是依賴于巖藻糖部分。這種情況下，有可能 不僅與AFP結合，而且也與其以外的具有巖藻糖的蛋白質非特異性結合。 因此，期望開發出以糖肽的巖藻糖部分和肽部分的氨基酸兩者為表位的 單克隆抗體。

用于解決課題的方案

本發明提供一種抗體，其為與糖肽反應的單克隆抗體，上述糖肽含 有核心巖藻糖和從附加糖鏈的天冬酰胺起向C末側連續的4個殘基以上 的氨基酸，所述抗體以上述糖肽的核心巖藻糖和糖肽的從附加糖鏈的天 冬酰胺起向C末側距離3個殘基以上的氨基酸兩者為表位。

本發明提供一種生產上述抗體的方法，其含有如下工序：將含有核 心巖藻糖和從附加糖鏈的天冬酰胺起向C末側連續的4個殘基以上的氨 基酸的糖肽抗原對動物進行免疫。

本發明提供一種生產產生上述抗體的雜交瘤的方法，其含有如下工 序：將含有核心巖藻糖和從附加糖鏈的天冬酰胺起向C末側連續的4個 殘基以上的氨基酸的糖肽抗原對動物進行免疫。

本發明提供一種單克隆抗體，其與以下的糖肽反應，

[化學式1]

與以下的糖肽不反應，

[化學式2]

與以下的糖肽不反應，

[化學式3]

本發明提供一種生產上述抗體的方法，含有以下工序：將含有以下 結構的糖肽抗原對動物進行免疫，

[化學式4]

(X為任意的糖鏈)。

本發明提供一種生產產生上述抗體的雜交瘤的方法，含有以下工序： 將含有以下結構的糖肽抗原對動物進行免疫，

[化學式5]

(X為任意的糖鏈)。

本發明提供一種巖藻糖基化AFP的測定方法，其使用上述抗體。

本發明提供一種巖藻糖基化AFP檢測用試劑盒，其含有巖藻糖基化 AFP的捕捉用抗體、巖藻糖基化AFP的檢測用抗體、固相，上述捕捉用 抗體或上述檢測用抗體為所述抗體。

本發明提供一種雜交瘤，其國際保藏編號為NITE BP-02263或NITE BP-02264。

發明效果

本發明提供一種以糖肽的巖藻糖部分和肽部分的氨基酸兩者為表位 的單克隆抗體。

附圖說明

圖1為示出實施例1中得到的克隆1F8-A4及2F11-2A9的蛋白質印 記的結果的圖(泳道1：巖藻糖基化AFP(AFP-L3/重組體)(陽性抗原)， 泳道2：非巖藻糖基化AFP(來自人血清的AFP(LEE biosolutions)的 LCA凝集素非吸附級分)(陰性抗原)，泳道3：巖藻糖基化ALP(Oriental 酵母/47787055))(陰性抗原)。

圖2為示出使用實施例1中得到的克隆I2-1F8時的各種抗原濃度下 的OD450的測定值的圖。

圖3為示出使用實施例1中得到的克隆I2-2F11時的各種抗原濃度 下的OD450測定值的圖。