[發明專利]脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710202124.1
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN107007627A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 王群;趙匯;張利寧;朱法良;郭春;潘真真
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P29/00;C12N5/0775
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 王志坤

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的應用。

背景技術

脂肪組織局部內皮細胞、脂肪細胞以及原駐的巨噬細胞三者相互作用，影響脂肪組織的穩態和功能。肥胖可以誘發脂肪細胞肥大，使其產生并釋放大量促炎細胞因子如TNF-α、IL-6、MCP-1等。這些促炎細胞因子的產生會上調內皮細胞的粘附分子、增加血管通透性，進而募集并活化大量巨噬細胞，擴大炎癥反應，最終發展成為慢性脂肪組織炎癥。脂肪組織中的巨噬細胞在脂肪組織炎癥中起重要作用，脂肪組織中巨噬細胞的浸潤活化以及大量促炎細胞因子TNF-α、IL-6和IL-12的釋放是脂肪組織炎癥的主要表現。慢性脂肪組織炎癥是胰島素抵抗以及Ⅱ型糖尿病的重要始發因素。因此控制脂肪組織炎癥是防治糖尿病和心血管等疾病發生發展的關鍵環節。

脂肪來源間充質干細胞(ADSC)存在于脂肪組織的血管基質成分(SVF)中，具有自我更新和多向分化潛能。ADSC在體外可被誘導分化為脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞和內皮細胞等不同的組織細胞，是目前組織修復和再生領域的研究重點和熱點。脂肪來源間充質干細胞外泌體可以攜帶具有生物學活性的蛋白質和RNA等物質，將有效成分及信息高效傳遞至受體細胞，在細胞間的信息交流中起重要作用。

目前對于脂肪來源間充質干細胞的研究主要涉及在腎臟、眼底疾病中的用途(CN102048756A)、在治療勃起功能障礙的用途(CN105902568A)、在制備肝纖維化治療制劑的用途(CN103436555A)、在制備治療骨性關節炎制劑的用途(CN105748519A)、在制備肝癌化療增敏制劑中的用途(CN103451152A)等，但迄今還未有關于脂肪來源間充質干細胞及其外泌體在治療脂肪組織炎癥反應的報道。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的應用。

本發明研究發現，脂肪來源間充質干細胞外泌體能夠抑制腹內脂肪組織巨噬細胞的浸潤活化，并抑制促炎細胞因子的產生和釋放，對脂肪組織炎癥具有很好的抑制效果，由此提出了下述的發明內容：

本發明的第一方面，提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的應用。

本發明中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體由如下方法制備而成：

(1)將剝離的脂肪組織分散于消化液中，以產生細胞懸浮液；

(2)離心細胞懸浮液，以形成細胞沉淀，分離沉淀，洗滌，得到含有脂肪來源間充質干細胞(ADSC)的血管基質成分(SVF)；

(3)在體外培養體系中對ADSC進行擴增培養，收集擴增培養后的上清液，濃縮，向濃縮后的上清液中加入外泌體提取試劑，即提取得到脂肪來源間充質干細胞外泌體。

優選的，步驟(1)中，所述消化液是由KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶組成；更優選的，KRB緩沖液和Ⅰ型膠原酶的組成比例為1ml：2mg。

優選的，步驟(2)中，離心轉速為2000rpm，離心時間為5分鐘。

優選的，步驟(3)中，擴增培養的條件為：用不含外泌體的10％胎牛血清的DMEM培養基(含有bFGF)培養ADSC。

優選的，步驟(3)中，所述外泌體提取試劑為Exoquick-TC^TM外泌體提取試劑。

本發明中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體具有TSG101、CD9、CD63和HSP90標志。

優選的，本發明中，所述脂肪來源間充質干細胞外泌體來源于小鼠附睪處脂肪組織。

優選的，本發明中，所述脂肪組織炎癥為飲食誘導肥胖所致的慢性脂肪組織炎癥。

本發明的第二方面，提供包含上述脂肪來源間充質干細胞外泌體的組合物在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的應用。

本發明的第三方面，提供脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療由巨噬細胞炎癥藥物中的應用。

本發明的有益效果：

本發明首次提出了脂肪來源間充質干細胞外泌體在制備治療脂肪組織炎癥藥物中的新用途，以及在制備治療巨噬細胞炎癥藥物中的新用途。本發明研究發現，脂肪來源間充質干細胞外泌體能夠抑制腹內脂肪組織巨噬細胞的浸潤活化，并抑制促炎細胞因子的產生和釋放，對脂肪組織炎癥具有很好的抑制效果。此外，本發明還提供了上述脂肪來源間充質干細胞外泌體的制備方法，操作簡單可行。

附圖說明