[發明專利]一種多重熒光PCR法聯合檢測呼吸道病原體的試劑盒

有效

• 申請號: 201710201003.5
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN107058622B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 童超;邱一帆
• 申請（專利權）人: 德必碁生物科技(廈門)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;陳彩芳

本發明提供一種多重熒光PCR法聯合檢測呼吸道病原體的試劑盒，包含6個組分：反應液A，反應液B，反應液C，酶混合液，陽性對照，陰性對照，包含常見的11種呼吸道病原體檢測（甲型流感病毒通用型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒的1/2/3型、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、A族鏈球菌），通過3個反應緩沖液進行擴增，每個反應緩沖液包含四個熒光通道，能夠排查臨床上90%的病原體感染。

技術領域

本發明屬于熒光定量PCR領域，具體涉及一種多重熒光PCR法聯合檢測呼吸道病原體的試劑盒。

背景技術

急性呼吸道感染有較高的發病率和死亡率，特別是下呼吸道感染造成極大的疾病負擔，全球有20%的學齡前兒童死于下呼吸道感染（SARI），90%的死亡病例歸因于肺炎。肺炎或急性肺炎是發熱呼吸道癥侯群的主要感染形式，也是造成兒童發病和死亡的主要原因。

1歲以內兒童肺炎發病率為0.01~0.68次/人年，5歲以內兒童肺炎發病率為0.14~0.66次/人年；肺炎死亡率在1歲以下兒童為485 /10萬~890 /10萬，5歲以下兒童為184 /10萬~1 223 /10萬。（數據來源參考“中國大陸肺炎發病率與死亡率”）。

現階段臨床上對呼吸道病原體主要通過臨床癥狀、分離培養及免疫檢測等常規手段進行診斷及病原體排查。分離培養耗時耗力，需要嚴格的實驗室環境、通常需要3天才能確診；而免疫檢測靈敏度低，且存在“窗口期”，感染后3~7天才能檢測出相應的抗原或抗體。

發明內容

本發明的目的在于提供一種多重熒光PCR法聯合檢測呼吸道病原體的試劑盒，主要采取多重實時熒光PCR法對呼吸道病原體進行檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明在一個試劑盒內包含常見的11種呼吸道病原體檢測（甲型流感病毒通用型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒的1/2/3型、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、A族鏈球菌），通過3個反應緩沖液進行擴增，每個反應緩沖液包含四個熒光通道，能夠排查臨床上90%的病原體感染。

所述試劑盒包括如下；反應液A包含甲型流感特異性引物及探針、乙型流感特異性引物及探針、腺病毒特異性引物及探針、呼吸道合胞病毒特異性引物及探針；

反應液B包含肺炎支原體特異性引物及探針、肺炎衣原體特異性引物及探針、副流感病毒特異性引物及探針、內控特異性引物及探針；

反應液C包含嗜肺軍團菌特異性引物及探針、肺炎鏈球菌特異性引物及探針、流感嗜血桿菌特異性引物及探針、A族鏈球菌特異性引物及探針；

酶混合液包含熱啟動Taq酶及M-MLV酶；

陽性對照包含特異性質粒及TE水；

陰性對照包含TE水。

引物探針序列：

試劑組分配方：