[發明專利]一種促進褐腐病菌生長的培養基

在審

• 申請號: 201710200080.9
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN106701651A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 陳鳳平;劉訓達;李冬亮;劉西莉;詹家綏
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于微生物工程技術領域，具體涉及一種促進褐腐病菌生長的培養基。

背景技術

褐腐病菌是引起桃、梨、櫻桃等核果類果樹的一種重要病原菌，現有研究主要采用PDA和YGA的培養基對其進行培養，但其一般需要培養6天才能長至直徑8cm左右，而且產孢量較少，存在褐腐病菌生長速度慢、孢子產量不夠開展相關研究所用的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種促進褐腐病菌生長的培養基，其可實現褐腐病菌生長速度的顯著提高，并能促進其分生孢子的產生，有效解決現有褐腐病菌生長速度慢、培養周期長、產孢量少的問題。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種促進褐腐病菌生長的培養基，其是通過將混合果蔬汁加入到滅菌后的YGA培養基中，制得所述促進褐腐病菌生長的培養基；其中，混合果蔬汁的加入量為YGA培養基體積的20%-40%，優選20%。

所述滅菌后的YGA培養基的制備方法為：將5g酵母粉、15g葡萄糖、15g瓊脂粉定容于1L水中，于121℃高壓濕熱滅菌20min后涼至60℃。

所述混合果蔬汁是將無菌番茄汁、無菌草莓汁及無菌山楂汁按重量比5:2:1混合制得。

本發明的顯著優點在于：本發明通過將一定量的混合果蔬汁加入到滅菌后的YGA培養基中，制得能夠顯著提高褐腐病菌生長速度、及其分生孢子產生的培養基，其制備快速、方便、經濟，可實現褐腐病菌的快速培養，有助于提高相關研究的工作效率。

附圖說明

圖1為不同桃褐腐病菌在不同培養基上的生長情況對比圖。

圖2為不同桃褐腐病菌在不同培養基上的產孢情況對比圖。

具體實施方式

為了使本發明所述的內容更加便于理解，下面結合具體實施方式對本發明所述的技術方案做進一步的說明，但是本發明不僅限于此。

按照文獻（Chen FP, Fan JR, Zhou T, Liu XL, Liu JL and Schnabel G, Baseline sensitivity of Monilinia fructicola from China to the DMI fungicide SYP-Z048 and analysis of mutants. Plant Disease, 2012,96(3): 416-422）所述方法，從桃上分離獲得3株桃褐腐病菌菌株（Monilinia fructicola），分別標記為NY9、MD2、PA7。

1 不同培養基制作：

PDA培養基的制備：38 g PDA粉，定容于1L水中，于121℃高壓濕熱滅菌20 min后待其涼至60℃左右，制成平板；

YGA培養基的制備：酵母粉5g，葡萄糖15g，瓊脂粉15g，定容于1L水中，于121℃高壓濕熱滅菌20 min后待其涼至60℃左右，制成平板；

混合果蔬汁培養基：酵母粉5g，葡萄糖15g，瓊脂粉15g，定容于1L水中，于121℃高壓濕熱滅菌20min后待其涼至60℃左右，分別按其體積10%、20%、30%和40%的量加入混合果蔬汁，混合均勻后配成不同含量混合果蔬汁的平板，依次標為YGVA1、YGVA2、YGVA3和YGVA4。

2 試驗方法

將3株桃褐腐病菌在PDA培養基中活化后，接種至新的PDA培養基上培養6d，于菌落邊緣同一圓周上打取直徑5 mm的菌餅，分別接種于PDA培養基、YGA培養基、YGVA1培養基、YGVA2培養基、YGVA3培養基、YGVA4培養基的平板上，22℃暗培養3d，分別測量各平板上的菌落直徑，并采用SPSS軟件中的最小顯著差異法進行統計分析，以獲得各菌株在不同培養基上的生長情況。每皿接種一個菌餅，每菌株每種培養基3次重復，整個試驗重復2次。

另采用直徑5 mm的藍色槍頭分別從上述培養平板中心接菌處向外依次輻射狀打取一定數量的菌餅，并記錄打取的菌餅數，然后置于加有10 mL無菌水（添加0.1%吐溫-20）的離心管中，加入5-8粒預先滅菌的玻璃珠，震蕩2 min，以洗脫孢子，用血球計數板計算孢子數，每處理重復3次，計算每平方厘米的平均孢子產量，并采用SPSS軟件中的最小顯著差異法進行統計分析。整個試驗重復2次。

3 試驗結果