[發明專利]目標蛋白質的純化方法

有效

• 申請號: 201710199775.X
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN107266526B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 髙橋亮
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 鄭天松

1.目標蛋白質的純化方法，其包括：

使含肽標簽的氨基酸序列、蛋白質分解酶的切斷位點的氨基酸序列及目標蛋白質的氨基酸序列的融合蛋白質和蛋白質分解酶在溶液中接觸，從上述融合蛋白質切斷上述肽標簽的工序、及

通過使含上述肽標簽、上述目標蛋白質和上述蛋白質分解酶的溶液與陰離子交換樹脂接觸，分離上述目標蛋白質和上述肽標簽，取得含上述目標蛋白質的溶液的工序，

其中

含上述肽標簽、上述目標蛋白質和上述蛋白質分解酶的溶液的鹽濃度是100mM以上500mM以下，pH是5以上9以下，

在上述融合蛋白質中，上述蛋白質分解酶的切斷位點的氨基酸序列在上述肽標簽的氨基酸序列和上述目標蛋白質的氨基酸序列之間，

上述肽標簽是聚陰離子性的，

上述含肽標簽的氨基酸序列、蛋白質分解酶的切斷位點的氨基酸序列及目標蛋白質的氨基酸序列的融合蛋白質的等電點不足5，

上述肽標簽的等電點是5以下，

上述目標蛋白質的等電點高于5，

上述蛋白質分解酶的等電點低于上述目標蛋白質的等電點，

上述蛋白質分解酶預先融合有與上述融合蛋白質中的肽標簽相同的肽標簽，

上述與肽標簽融合的蛋白質分解酶與上述陰離子交換樹脂結合，

上述與肽標簽融合的蛋白質分解酶無上述蛋白質分解酶的切斷位點的氨基酸序列，且

從上述融合蛋白質切下的上述肽標簽和預先融合有相同的肽標簽的上述蛋白質分解酶與上述陰離子交換樹脂結合，從上述融合蛋白質切下的上述目標蛋白質不與上述陰離子交換樹脂結合而通過。

2.權利要求1所述的方法，其中上述聚陰離子性肽標簽含2個以上的酸性氨基酸殘基。

3.權利要求1所述的方法，其中上述聚陰離子性肽標簽含SEQ ID NO：1～8之任一個的氨基酸序列。

4.權利要求1所述的方法，其中上述蛋白質分解酶的等電點不足6。

5.權利要求1所述的方法，其中

在含上述目標蛋白質的溶液的取得工序中，

使含上述聚陰離子性肽標簽、上述目標蛋白質和上述預先融合有與上述融合蛋白質中的肽標簽相同的肽標簽的蛋白質分解酶的溶液通過陰離子交換樹脂，

使上述聚陰離子性肽標簽和上述預先融合有與上述融合蛋白質中的肽標簽相同的肽標簽的蛋白質分解酶結合于上述陰離子交換樹脂，

取得含不與上述陰離子交換樹脂結合的上述目標蛋白質的通過級分。

6.權利要求1～5之任一項所述的方法，其在從上述融合蛋白質切斷上述肽標簽的工序之前包括除去混雜蛋白質的工序。

7.權利要求6所述的方法，其在除去上述混雜蛋白質的工序之前包括向宿主細胞導入含編碼上述融合蛋白質的多核苷酸的載體，使上述融合蛋白質在宿主細胞表達而得到含上述融合蛋白質和上述混雜蛋白質的試樣溶液的工序。

8.權利要求6所述的方法，其中在除去上述混雜蛋白質的工序中，通過使含上述融合蛋白質及上述混雜蛋白質的試樣溶液接觸陰離子交換樹脂，分離上述融合蛋白質和上述混雜蛋白質，除去上述混雜蛋白質。

9.權利要求6所述的方法，其中上述試樣溶液的鹽濃度是50mM以上500mM以下。

10.權利要求6所述的方法，其中在除去上述混雜蛋白質的工序中，

使上述試樣溶液通過陰離子交換樹脂而取得結合了上述融合蛋白質的上述陰離子交換樹脂和含上述混雜蛋白質的通過級分，通過使用鹽濃度600mM以上的緩沖液從上述陰離子交換樹脂溶出上述融合蛋白質，除去上述混雜蛋白質。

11.權利要求6所述的方法，其中上述肽標簽含12個殘基以上的酸性氨基酸殘基。