[發明專利]一種采用分級培養基進行甘薯組織培養的方法

在審

• 申請號: 201710198013.8
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN107410019A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 王立國;王剛;李燕;李建軍;高翔;張嘉
• 申請（專利權）人: 天津豐華裕隆農業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津市新天方有限責任專利代理事務所12104
• 代理人: 張強

技術領域

本發明涉及甘薯組織培養的領域，尤其涉及一種采用分級培養基進行甘薯組織培養的方法。

背景技術

甘薯是我國四大主要糧食作物之一，也是飼料和輕工業的重要原料。隨著我國生產的發展和人們食物結構的改變，甘薯作為集能源、食品加工、保健和藥用、出口創匯等功能于一身的經濟作物，越來越受到人們的關注。甘薯是一種雜種優勢作物，但采用營養繁殖常會導致甘薯病毒病傳播蔓延，致使產量和質量下降。

發明內容

本發明旨在解決現有技術的不足，而提供一種采用分級培養基進行甘薯組織培養的方法。

本發明為實現上述目的，采用以下技術方案：

一種采用分級培養基進行甘薯組織培養的方法，具體步驟為：

(1)外植體的建立：

取甘薯葉片用自來水沖洗，然后在洗衣粉溶液中浸泡5-10min，再用自來水沖洗干凈，置于超凈臺上進行消毒，消毒完成后將葉片切成0.5cm×0.5cm的小方塊備用；

(2)愈傷組織的誘導：

將經過消毒處理的甘薯葉片接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+2,4-D0.5mg/L上進行暗培養15天；或者將經過消毒處理的甘薯葉片接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+NAA 0.5mg/L上進行光培養12天；

(3)愈傷組織的分化：

將接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+2,4-D 0.5mg/L上的愈傷組織轉接于分化培養基MS+KT 1mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.5mg/L+GA₃ 0.1mg/L上進行光培養45天；或者將接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+NAA 0.5mg/L上愈傷組織直接進行光培養45天；

(4)試管苗的增殖和生長：

將誘導分化出的試管苗切成帶1個腋芽的莖段轉接至MS增殖培養基上進行增殖生長；

(5)試管苗的生根：

將經過增殖生長的試管苗接種于1/2MS生根培養基上進行生根；

(6)生根試管苗的移栽：

待試管苗根長1.2cm時，在溫室自然光下煉苗2天，再揭開封口膜3天，用無菌水洗去根部培養基，移栽入大棚里，保溫保濕生長。

外植體的建立過程中，甘薯葉片在超凈臺上進行消毒的過程為：將甘薯葉片在75％的酒精中浸泡，浸泡時間為30-40s，用無菌水沖洗5-8次；然后用1％的HgCl₂溶液進行消毒15min，用無菌水沖洗5-8次；最后用無菌紙吸干葉片表面水分。

試管苗的生根過程中，生根培養基1/2MS的pH為5.8-6.0，瓊脂0.7％，同時采用3％白糖和自來水。

本發明的有益效果是：本發明采用了分級培養基對甘薯進行組織培養，代替傳統的營養繁殖，這樣能夠盡量避免病毒繁殖；不同階段采用不同的培養基進行培養，為甘薯快繁和大規模試管苗商業化生產提供了科學依據。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步說明：

實施例1：

一種采用分級培養基進行甘薯組織培養的方法，具體步驟為：

(1)外植體的建立：

取甘薯葉片用自來水沖洗，然后在洗衣粉溶液中浸泡5min，再用自來水沖洗干凈，置于超凈臺上進行消毒，消毒完成后將葉片切成0.5cm×0.5cm的小方塊備用；

(2)愈傷組織的誘導：

將經過消毒處理的甘薯葉片接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+2,4-D0.5mg/L上進行暗培養15天；

(3)愈傷組織的分化：

將接種于誘導培養基MS+KT 2mg/L+2,4-D 0.5mg/L上的愈傷組織轉接于分化培養基MS+KT 1mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.5mg/L+GA₃ 0.1mg/L上進行光培養45天；

(4)試管苗的增殖和生長：

將誘導分化出的試管苗切成帶1個腋芽的莖段轉接至MS增殖培養基上進行增殖生長；

(5)試管苗的生根：

將經過增殖生長的試管苗接種于1/2MS生根培養基上進行生根；

(6)生根試管苗的移栽：

待試管苗根長1.2cm時，在溫室自然光下煉苗2天，再揭開封口膜3天，用無菌水洗去根部培養基，移栽入大棚里，保溫保濕生長。