[發(fā)明專利]一種同型半胱氨酸測定試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710196949.7
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN106970230B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉光華
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市伊川生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/527
• 分類號: C12Q1/527
• 代理公司: 北京商專永信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11400
• 代理人: 方挺;時寅

本申請?zhí)峁┮环N同型半胱氨酸測定試劑盒，含有試劑1和試劑2，所述試劑1含有TRIS、HCL、山梨酸鉀、serine、NADH、LDH；所述試劑2含有TRIS、HCL、山梨酸鉀、CBS、CBL。本申請?zhí)峁┑脑噭┖邢啾扔谒饷副壬ㄖ恍枰脚悸?lián)即可完成檢測，所需要原材料較少，成本較低。在HCY含量低于100umol/L時，均可采用線性定標，其操作簡單，線性范圍較寬。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉同型半胱氨酸測定試劑盒。

背景技術(shù)

同型半胱氨酸(HCY)，是一種含巰基的氨基酸，其主要來源于飲食攝取的蛋氨酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中一個重要的中間產(chǎn)物，其本身并不參加蛋白質(zhì)的合成。

在體內(nèi)，約1/2的HCY和甲基四氫葉酸在蛋氨酸合成酶(Methionine Synthasereductase,MS)的作用下生成蛋氨酸和四氫葉酸。四氫葉酸在N5,N10-亞甲基四氫葉酸還原酶(Methylenetetralydrofolate,MTHFR)的作用下生成甲基四氫葉酸。其余約1/2的HCY通過轉(zhuǎn)硫基途徑，即HCY與絲氨酸在胱硫醚β合成酶(Cystathionineβ-synthase,CBS)的作用下形成胱硫醚，一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸，最后生成丙酮酸、硫酸和水，此過程需維生素B6作為輔酶以及絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶，另一部分則生成同型絲氨酸。

任何原因引起前兩條代謝途徑障礙時，升高的HCY在氨基酰-tRNA合成酶的作用下，生成同型半胱氨酸硫內(nèi)酯(homocysteine thiolactone,HTL)，HTL是HCY在氨基酰-tRNA合成酶編輯或校正過程中形成的反應(yīng)產(chǎn)物，屬一種環(huán)硫酯。HCY可以直接或間接導致血管內(nèi)皮細胞損傷，促進血管平滑肌細胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強血小板功能，促進血栓形成。

目前常用的檢測同型半胱氨酸的方法包括以下幾種：

同位素法：由Refsum等1985年建立的方法。該方法通過C¹⁴標記的腺苷與HCY縮合后，經(jīng)色譜分離，液體閃爍計數(shù)放射強度來測HCY濃度。該方法靈敏度高，特異性強，但操作繁瑣且有放射污染，未能推廣使用。

色譜法：1987年Stabler首先報道了氣相色譜―質(zhì)譜法測定同型半胱氨酸。該法可同時測定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多種物質(zhì)。雖然靈敏度、特異性好，但儀器價格昂貴而不能推廣。高效液相色譜法(HPLC)是目前比較成熟且推廣使用的方法，不足之處是樣品處理、層析條件、樣品檢測及定量的諸多變異，使其難以標準化。Fiskertrand等首先于1993年用全自動高效液相色譜法對血漿和尿液中的HCY和硫醇物進行測定。HPLC根據(jù)衍生方式(柱前或柱后衍生)、檢測方法(熒光、電化學)可分為多種方法。應(yīng)用HPLC準確測定同型半胱氨酸需要優(yōu)良的設(shè)備、高超的技術(shù)經(jīng)驗和應(yīng)用HPLC方法適當?shù)臅r間。因 此，由于該方法操作難度大，對設(shè)備的要求苛刻，不適合作為常規(guī)的醫(yī)療檢測。

水解酶比色法：利用S-腺苷甲硫氨酸、還原型輔酶Ⅰ、α-酮戊二酸5.0mmol/L同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、谷氨酸脫氫酶、S-腺苷同型半胱氨酸水解酶、腺苷脫氨酶偶聯(lián)反應(yīng)測定，根據(jù)其反應(yīng)速率快慢測定樣本中HCY水平。此方法所需要的原材料較多且價格比較昂貴，大規(guī)模生產(chǎn)時成本較高，測定時為非線性定標，操作比較麻煩，由于存在非線性定標的局限性，用于試劑測定時線性也較窄，最高只可達到50umol/L。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種同型半胱氨酸測定試劑盒包括體積比為4:1的試劑1和試劑2，所述試劑1含有溶質(zhì)TRIS、HCL、山梨酸鉀、serine、NADH、LDH；所述試劑2含有溶質(zhì)TRIS、HCL、山梨酸鉀、CBS、CBL。