[發明專利]一種摘除小鼠松果體的實驗動物模型構建方法及其應用

在審

• 申請號: 201710195217.6
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN106859801A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 汪偉
• 申請（專利權）人: 江蘇省血吸蟲病防治研究所
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 時旭丹,張仕婷

技術領域

一種摘除小鼠松果體的實驗動物模型構建方法及其應用，屬于動物模型構建技術領域。

背景技術

許多松果體代謝研究表明，松果體是探究生物晝夜節律的絕佳研究對象。同時，松果體在季節性調節、光依賴性繁殖等領域中所起的重要作用也已獲得廣泛證明。褪黑素是一種主要由松果體分泌的激素，但有約25%的褪黑素分布于松果體外。既往研究已經證實，褪黑素既是一種神經內分泌激素，也是一種免疫調節劑。現有的松果體摘除術容易傷及上矢狀竇及橫竇，引起致命性大出血，實驗模型構建困難，成功率低；且模型動物為大鼠、雞等，沒有小鼠模型。本發明操作簡便，模型構建時間短，成功率高，所需器械經濟便捷，為目前小鼠松果體去除的實驗模型構建提供了一種新的快速簡便方法。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術上摘除小鼠松果體過程中出血過多、術后小鼠存活率低、模型構建成功率低的問題，而提供的一種可以快速高效摘除小鼠松果體的實驗動物模型構建方法及其應用。

本發明的技術方案：一種摘除小鼠松果體的實驗動物模型構建方法，其外科手術步驟如下：

（1）暴露矢狀縫和人字縫：取5~6周齡雄性C57BL/6小鼠麻醉、頭頂部脫毛、局部消毒后固定于操作臺上，在兩耳正中間沿頭頂部正中央，從枕骨向頂骨，沿矢狀縫方向做一長10 mm的縱向切口至兩眼之間；分離骨膜以暴露矢狀縫和人字縫；

（2）顱骨切口：以人字縫為中心，在顱骨上用牙科機配牙科裂鉆一切口ABCD，如圖2所示；在此切口范圍內再做一切割邊EF，如圖3所示；取下骨片CDEF，如圖4所示；暴露硬腦膜及上矢狀竇；

（3）雙重結扎上矢狀竇：沿AD、BC邊切開硬腦膜，雙重結扎上矢狀竇；

（4）剪斷后矢狀竇，上矢狀竇通過結扎的手術線以AB邊為軸提起，同時帶起顱骨骨片，如圖5所示；

（5）灼燒松果體，如圖6所示；

（6）將骨片放下，用含生理鹽水棉球輕壓數秒即可止血；

（7）縫合傷口，在傷口處滴加數滴青霉素鈉以預防傷口感染。

所述顱骨切口，顱骨切口為一上底邊AB長3mm、下底邊CD長4 mm、高4 mm的等腰梯形；AB位于枕骨，CD位于頂骨，用顯微鑷輕輕提起CD邊，將5-0號縫合線置于CD邊下方，左右手分別輕輕左右拉動手術線，緊貼硬腦膜鈍性分離顱骨及硬腦膜至AB邊，勿要剝離骨片；用顯微鑷夾住CD邊，并以AB邊為軸輕輕抬起約45°，用眼科剪剪去距CD邊1 mm處的EF邊，取出骨片CDEF，將骨片ABFE輕輕放下。

所述雙重結扎上矢狀竇，使用縫合針鈍端由CF切口緊貼硬腦膜進入，在矢狀竇下方穿過小鼠硬腦膜及大腦之間，由DE切口出，勿要取出縫合針；穿入100 mm長5-0號縫合線后，縫合針鈍端由DE切口原路返回穿出CF切口，同時手術線由DE切口穿入CF切口穿出，雙重結扎矢狀竇。

所述灼燒松果體，左手提起結扎上矢狀竇的手術線60°，右手同時持鐵絲或擰緊的接種環在酒精燈火焰上方將鐵絲或接種環燒紅，骨片提起時可見松果體被硬腦膜帶起，黏附在骨片上，此時將燒紅的鐵絲或接種環直接在骨片上灼燒松果體，肉眼可見松果體被去除。

用所述方法摘除小鼠松果體的實驗動物模型的應用，用于松果體代謝研究，褪黑素分泌的研究。

本發明的有益效果：手術時間短，整個過程10~15min，可大批量進行實驗動物模型構建；通過牙科機配牙科裂鉆切割顱骨，可有效提高手術效率，更好地控制切割力度及深度，避免損傷硬腦膜及靜脈竇；采用等腰梯形開口切割顱骨，可視化去除松果體，避免了小鼠大腦損傷，結扎上矢狀竇、加熱接種環在灼燒松果體的過程中均起到了止血作用，避免了顱內大出血，也保證了松果體摘除的正確性，可信度高，同時手術器械經濟便捷。

附圖說明

圖1為切口Ⅰ示意圖。

圖2為切口Ⅰ的ABCD示意圖。

圖3為剪去EF邊示意圖。

圖4為去除骨片CDEF示意圖。

圖5為結扎并剪斷上矢狀竇示意圖。

圖6為松果體去除示意圖。

具體實施方式

實施例1

1、麻醉：腹腔注射戊巴比妥鈉 80 mg/kg。

2、脫毛：去除小鼠額頂及兩耳間毛發。

3、消毒：碘伏棉球擦拭脫毛后裸露的頭皮及周圍。