[發明專利]一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201710194027.2
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN106834194B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 鐘積東;譚志奇;周艷
• 申請（專利權）人: 湖南神隆高科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑，其特征在于，包含濃度為1～50億/g的保藏編號為CCTCC No：M 2016277的放線菌CZ1367的孢子粉，以及濃度為50～200億/g的保藏編號為CCTCC No：M 2016276的短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞；

其中，所述放線菌CZ1367的孢子粉由以下方法制備獲得：

步驟1、將放線菌CZ1367接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培養7天，獲得試管種；

步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm²所述試管種，28℃下于轉速為200r/min震蕩培養3天，獲得種子液；

步驟3、先配制固體發酵培養基，固體發酵培養基配方為麩皮1000g，121℃滅菌60分鐘，冷卻后烘干，以30％的接種量接入步驟2中得到的種子液，并補加無菌水，至含水量為50％，28℃下固體發酵7天，獲得所述孢子粉；

所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞由以下方法制備獲得：

步驟1、將短小芽胞桿菌WX812接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，瓊脂20g，水1000ml，pH 7.2，于30℃下培養1天，獲得試管種；

步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm²所述試管種，30℃下于轉速為200r/min震蕩培養6-8h，獲得種子液；

步驟3、先配制液體發酵培養基，液體發酵培養基配方為大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl 0.2％，CaCO₃ 0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，KH₂PO₄ 0.05％，pH7.0；121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入2％的步驟2中得到的種子液，30℃下于轉速為220rpm的發酵罐中培養3天得發酵液，用轉速為4000rpm的離心機離心發酵液10分鐘，取沉淀干燥，獲得所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。

2.權利要求1所述復合微生物菌劑在防治稻瘟病或制備防治稻瘟病農藥制劑中的應用。

3.權利要求1所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括：

制備放線菌CZ1367的孢子和短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞，然后調整兩者的濃度混合，獲得所述復合微生物菌劑；

其中，所述制備放線菌CZ1367的孢子步驟具體如下：

步驟1、將放線菌CZ1367接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培養7天，獲得試管種；

步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm²所述試管種，28℃下于轉速為200r/min震蕩培養7天，獲得種子液；

步驟3、先配制固體發酵培養基，固體發酵培養基配方為麩皮1000g，121℃滅菌60分鐘，冷卻后烘干，以30％的接種量接入步驟2中得到的種子液，并補加無菌水，至含水量為50％，28℃下固體發酵7天，獲得所述孢子粉；

所述制備短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞步驟具體如下：

步驟1、將短小芽胞桿菌WX812接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，瓊脂20g，水1000ml，pH 7.2，于30℃下培養1天，獲得試管種；

步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm²所述試管種，30℃下于轉速為200r/min震蕩培養6-8h，獲得種子液；

步驟3、先配制液體發酵培養基，液體發酵培養基配方為大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl 0.2％，CaCO₃ 0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，KH₂PO₄ 0.05％，pH7.0；121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入2％的步驟2中得到的種子液，30℃下于轉速為220rpm的發酵罐中培養3天得發酵液，用轉速為4000rpm的離心機離心發酵液10分鐘，取沉淀干燥，獲得所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。