[發明專利]一種利用甲烷產聚?β?羥基丁酸酯的甲烷氧化菌?異養菌混合菌群的馴化方法在審
| 申請號： | 201710194019.8 | 申請日： | 2017-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN107058206A | 公開（公告）日： | 2017-08-18 |
| 發明（設計）人： | 周集體;張婷婷;王曉偉;張玉 | 申請（專利權）人： | 大連理工大學 |
| 主分類號： | C12N1/36 | 分類號： | C12N1/36 |
| 代理公司： | 大連理工大學專利中心21200 | 代理人： | 溫福雪,侯明遠 |
| 地址： | 116024 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 甲烷 羥基 丁酸 氧化 異養菌 混合 馴化 方法 | ||
1.一種利用甲烷產聚-β-羥基丁酸酯的甲烷氧化菌-異養菌混合菌群的馴化方法，其特征在于，步驟如下：
步驟1：將富含微生物的活性污泥作為富集馴化甲烷氧化菌-異養菌混合菌群的原料；
步驟2：培養基的配制
(1)配制不含氮元素的礦物鹽NFMS培養基，其組成為：0.272g/L的KH2PO4,2.868g/L的Na2HPO4·H2O，0.1g/L的MgSO4·7H2O，0.20g/L的CaCl2·6H2O和1mL/L的微量元素；
(2)配制微量元素溶液：250mg/L的Na-EDTA，500mg/L的FeSO4·7H2O，380mg/L的Fe-EDTA，400mg/L的ZnSO4·7H2O，15mg/L的H3BO3，20mg/L的MnCl2·4H2O，260mg/L的Na2MoO4·2H2O，10mg/L的NiCl2·6H2O，50mg/L的CoCl2·6H2O；
(3)配制CuSO4·5H2O儲備液；
(4)向NFMS培養基加入CuSO4·5H2O儲備液，使CuSO4的摩爾濃度為5-10μmol/L，以提高混合菌群的MMO活性；
步驟3：甲烷氧化菌-異養菌混合菌群的富集馴化
(1)向體系中加入活性污泥和步驟2(4)得到的NFMS培養基，使體系頂空和液相的體積比為2:1-5:1，將體系密封；
(2)更換頂空氣體，使頂空氣體的組成為10-20％的氧氣、25％的甲烷氣和55-65％的氮氣；以甲烷氣為唯一碳源，以氮氣作為馴化過程唯一氮源，進行甲烷氧化菌-異養菌混合菌群的富集馴化；為保證充足的氣體底物，每24-72小時更換一次頂空氣體；
(3)每6-10天按4-10％的體積比例將富集到的菌液接種到新的步驟2(4)得到的NFMS培養基中，以保證充足的營養物質；
步驟4：PHB合成過程
(1)在每次循環結束時，收集菌體進行PHB合成；
(2)向體系中加入收集的菌體和新的步驟2(4)得到的NFMS培養，使體系頂空和液相的體積比為5:1-11:1，將體系密封；
(3)更換頂空氣體，使頂空氣體的組成為50-75％甲烷和25-50％氧氣，在沒有氮源的條件下進行PHB合成；為保證充足的氣體底物，每24-48小時更換一次頂空氣體，72小時后，PHB的合成過程完成；
步驟5：經過220-320天后的培養后，甲烷氧化菌-異養菌混合菌群的馴化完成。
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