[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)PCT的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710193931.1
• 申請(qǐng)日: 2017-03-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106841606B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周臘梅;黃若磐;胡守旺
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/558
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬(wàn)志香

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)PCT的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法，所述試紙條包括底襯、以及依次設(shè)在所述底襯上的樣品墊、金標(biāo)墊、包被膜和吸水紙，所述金標(biāo)墊上包被有膠體金標(biāo)記的抗人PCT檢測(cè)抗體和雞IgY抗體，所述包被膜包括平行設(shè)置、且相互間隔的檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)，所述檢測(cè)區(qū)包被有抗PCT包被抗體，所述對(duì)照區(qū)包被有山羊抗雞IgY抗體，所述抗PCT檢測(cè)抗體具有如SEQ ID No:1～SEQ ID No:5任一所示氨基酸序列的抗原表位。本發(fā)明的膠體金免疫層析試紙條具有簡(jiǎn)便、快捷、實(shí)用、靈敏、高效、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的有益效果，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人體血清PCT的半定量檢測(cè)，具備較高的靈敏度和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種半定量檢測(cè)降鈣素原(PCT)的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

降鈣素原(procalcitonin,PCT)是1992年發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)降鈣素的前體物質(zhì)，無(wú)激素活性，是由116個(gè)氨基酸殘基組成，相對(duì)分子量為13kD的糖蛋白。生理?xiàng)l件下，血中的降鈣素原主要由甲狀旁腺的C細(xì)胞合成。在胞內(nèi)，PCT會(huì)被逐步水解成為CT、抗鈣素(katacalcin)、N-端殘基三部分被分泌出細(xì)胞外。故血清PCT的濃度極低，且無(wú)較大波動(dòng)(＜50ng/L)，一般難以檢測(cè)。在系統(tǒng)炎癥反應(yīng)綜合癥、濃毒血癥、敗血癥等嚴(yán)重細(xì)菌感染疾病條件下，患者身體其他部位的多種細(xì)胞均能大量合成PCT，并以蛋白原的形式分泌至胞外，導(dǎo)致血清中PCT顯著升高，其濃度可達(dá)正常水平的幾倍甚至上萬(wàn)倍，研究還發(fā)現(xiàn)PCT濃度和感染嚴(yán)重程度成正相關(guān)，因而，相較于傳統(tǒng)的C-反應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子、補(bǔ)體測(cè)定等檢測(cè)指標(biāo)，PCT蛋白憑借其自身早期性、穩(wěn)定性、特異性、正相關(guān)性的主要特點(diǎn)，已經(jīng)發(fā)展成為快速診斷嚴(yán)重細(xì)菌感染、判斷細(xì)菌感染性疾病病情與預(yù)后及其療效觀察的可靠標(biāo)記物。

血清降鈣素(Calcitonin，CT)是最先從甲狀腺腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中提取的一種多肽激素，因此成為該腫瘤血清學(xué)標(biāo)志物。PCT，CT的前體物，116個(gè)氨基酸糖蛋白，在人體內(nèi)的半衰期約為20-24小時(shí)，穩(wěn)定性好；在正常人血清中含量極低，在除甲狀腺創(chuàng)傷或腫瘤外，系統(tǒng)炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)、敗血癥、急慢性肺炎、急性胰腺炎、活動(dòng)性肝炎、創(chuàng)傷等患者血清中顯著升高，尤其對(duì)SIRS/敗血癥，PCT(與WBC、IL-6、TNF-2、CRP、可溶性選擇素等比較)是一種非常敏感特異的血清學(xué)標(biāo)志。而在病素毒感染、腫瘤物術(shù)創(chuàng)傷時(shí)則保持低水平，PCT在嚴(yán)重細(xì)菌感染(2-3小時(shí)后)早期即可升高，因此具有早期診斷價(jià)值；在局部感染、病毒感染、慢性非特異性炎癥、癌癥發(fā)熱、移植物宿主排斥反應(yīng)或自身免疫性等疾病時(shí)PCT濃度不增加或輕微增加，而只在嚴(yán)重的全身系統(tǒng)性感染時(shí)才明顯增加，這就決定了PCT的高度特異性，因此也可用于各種臨床情況的鑒別診斷；PCT濃度和炎癥嚴(yán)重程度成正相關(guān)，并隨著炎癥的控制和病情的緩解而降低至正常水平，因而PCT又可作為判斷病情與預(yù)后以及療效觀察的可靠指標(biāo)

PCT在臨床上具有廣泛而又重要的應(yīng)用價(jià)值；并且對(duì)ICU病人的死亡率及住院時(shí)間提供標(biāo)準(zhǔn)。PCT可廣泛用于ICU病房、血液科、腫瘤科、兒科、早產(chǎn)兒及新生兒監(jiān)護(hù)室、外科、內(nèi)科、器官移植科、急診科和治療實(shí)驗(yàn)室等。

目前PCT檢測(cè)方法有：

1、放射免疫學(xué)分析法——該方法能檢測(cè)正常人的血清PCT，可靠敏感度為4pg/ml，但該法檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)(19～22h)，而且有放射性元素的污染，使得使用受到限制。

2、雙抗夾心免疫化學(xué)發(fā)光法——該法操作簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)，敏感性高，測(cè)定的低限值為0.1ng/ml，2h可以出結(jié)果。

3、金標(biāo)法——該法具有快速簡(jiǎn)便，易觀察的特點(diǎn)。

4、透射免疫濁度法——該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速，可自動(dòng)化，適合于批量檢測(cè)，但是免疫透射比濁的方法學(xué)及臨床應(yīng)用尚需做進(jìn)一步的驗(yàn)證。