[發明專利]一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法

在審

• 申請號: 201710193427.1
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN106841168A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 張萍;鄭大威;劉曉瑩;林太鳳;王惠琴;易鵬
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 北京華旭智信知識產權代理事務所(普通合伙)11583
• 代理人: 趙文靜

技術領域

本發明涉及一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，屬于衛生健康與食品安全檢測領域。

背景技術

在細菌性食物中毒臨床病例中，沙門氏菌引起的食物中毒常居榜首，是引起急性胃腸炎的主要病原菌之一，其可導致人畜共患病，臨床上病發率正逐年上升。鼠傷寒沙門氏菌是一群非適應性或泛嗜性的沙門氏菌，具有廣泛的宿主，是目前世界各國分離率最高的菌型之一。鼠傷寒沙門氏菌是引起小兒腸道感染最常見的致病血清，而抗菌藥物是治療鼠傷寒沙門氏菌引起腸道感染必不可少的手段。但是不少沙門氏菌已對多種抗生素產生耐藥性，并出現多重耐藥性，尤其是鼠傷寒沙門氏菌。頭孢菌素類抗生素是臨床上應用廣泛的一類抗生物，第三代頭孢菌素有著獨特的藥效學和較低的耐藥率，因而是用于治療沙門氏菌侵襲性感染和嚴重腹瀉最常用的藥物。對鼠傷寒沙門氏菌的抑制作用原理是通過與細菌內膜上青霉素結合蛋白PBPs相結合，抑制轉肽酶在細胞壁合成的最后一步交叉連接中的轉肽作用，使交叉連接不能形成，影響細胞壁合成，導致細菌溶菌死亡。而耐頭孢菌素鼠傷寒沙門氏菌的出現及數量的增加已引起全世界的關注，因該菌極易產生耐藥性，使抗菌藥物療效較差，病程遷延不愈，成為臨床治療的難點。

近年來，由于各種抗菌藥物的廣泛應用，導致出現許多新型耐藥菌株。某些重癥感染者會因抗菌藥物劑量不足延誤治療時機，或盲目的大劑量治療造成藥物中毒。在致病菌檢驗方面，正確、快速的報告病原菌和耐藥菌成為治療環節中的重中之重。

發明內容

鑒于背景技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，其能解決檢測過程繁瑣、耗時長等問題。

為了達到上述目的，本發明提供一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，所述樣品為食品樣品或臨床樣品中，包括以下步驟：(Ⅰ)采用鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌制作參考拉曼增強光譜，包括利用拉曼光譜儀掃上述致病菌，以得到拉曼增強光譜；(Ⅱ)利用拉曼光譜儀掃待檢測的樣品，以得到樣品的拉曼增強光譜；(III)將樣品的拉曼增強光譜與參考拉曼增強光譜進行比對，即根據拉曼光譜的特征峰峰位與強度進行定性識別，或者對樣品的拉曼增強光譜與參考拉曼增強光譜中的950～1300cm^-1波段進行主成分-線性判別分析(PCA-LDA)，實現對鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的鑒別；所述鼠傷寒沙門氏非耐藥菌的特征譜峰為663cm^-1、780cm^-1、875cm^-1、958cm^-1、990cm^-1、1062cm^-1、1164cm^-1和1252cm^-1；所述鼠傷寒沙門氏耐藥菌的特征譜峰為663cm^-1、825cm^-1、920cm^-1、958cm^-1、990cm^-1、1062cm^-1、1210cm^-1和1252cm^-1。

在根據本發明所述的一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，在步驟(I)之前，還包括鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌菌懸液的制備。

在根據本發明所述的一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，所述制備包括合成拉曼增強試劑、制備細菌培養基以及配置所述菌懸液。

在根據本發明所述的一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，主成分分析采用的軟件為SPSS。

在根據本發明所述的一種用于檢測識別樣品中鼠傷寒沙門氏耐藥菌與非耐藥菌的表面增強拉曼光譜方法，拉曼光譜儀的掃描參數：激光功率為200-250mw，激發光波長為785nm，掃描光譜范圍為400～1800cm^-1，積分時間為5-20s，分辨率為4cm^-1。

合成拉曼增強試劑的具體操作過程為：取10mL氯金酸溶液至圓底燒瓶中，加熱攪拌至溶液微沸，然后加入1mL濃度為2％的檸檬酸三鈉溶液，繼續保持微沸3min，最后將圓底燒瓶冷卻，得到檢測用納米金溶膠顆粒。