[發明專利]一種利用青海弧菌q67檢測真菌毒素的方法

在審

• 申請號: 201710192414.2
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN107045026A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 龔亮;蔣躍明;簡琪潔;屈紅霞
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司44001
• 代理人: 劉明星

技術領域

本發明屬于天然產物領域，具體涉及一種利用青海弧菌q67檢測真菌毒素的方法。

背景技術

青海弧菌Q67(Vibrio qinghaiensis sp.Q67)是我國學者發現的一種淡水發光細菌。目前已廣泛應用在燃油毒性的檢測(Application number CN 200910057297)、霧霾天污染物毒性的檢測(Application number CN 201510098688)、獸藥殘留檢測(Application number CN 201520337859)、農藥殘留檢測(Application number CN 201210581427)等。其也應用于真菌毒素萎焉酸的檢測，但真菌毒素種類繁多，主要包括：嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、玉米烯酮(Zearalenone，ZON)，赭曲霉素A(Ochratoxin A，OA)，棒曲霉素(Patulin)，桔青霉素(Citrinin)。對于這些真菌毒素是否能用青海弧菌Q67檢測并無相關研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用青海弧菌q67檢測真菌毒素的方法。

本發明的利用青海弧菌Q67檢測真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、青海弧菌Q67(Vibrio-qinghaiensis sp.-Q67)菌懸液的制備：將青海弧菌Q67置于質量分數為0.8％的氯化鈉溶液中制成菌懸液，使得菌懸液的相對發光強度為10～30萬RLU(Relative Light Units)；

b、將待測樣品用質量分數為0.8％的氯化鈉溶液稀釋成不同濃度，按照菌懸液與不同濃度的待測樣品稀釋液1：9的體積比進行混合，于22±2℃靜置15min，再測定發光強度，再以真菌毒素標準品建立標準曲線，建立標準曲線時真菌毒素標準品和待測樣品的發光細菌的抑制率是依據公式lgc_t＝blgΓ_t+lga進行計算，其中，Γ是測定值，c是測試樣本的百分率，b是斜率，lga是斜距，由此根據真菌毒素標準品的標準曲線擬合獲得回歸方程，選取待測樣品稀釋液中真菌毒素含量為1～40μg/ml的作為標準樣，計算不同濃度的各待測樣品稀釋液中的真菌毒素含量，以此標準樣計算待測液體或固體樣品中的真菌毒素的含量；

所述的真菌毒素為：Fumonisin b1、嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、玉米烯酮(Zearalenone，ZON)、棒曲霉素(Patulin)和/或桔青霉素(Citrinin)。

所述的步驟(2)中的于22±2℃靜置優選為于22℃靜置。

本發明中調節pH值的物質可以是為氫氧化鈉和鹽酸。

本發明的青海弧菌Q67(Vibrio-qinghaiensis sp.-Q67)屬于現有技術中已知的菌株，很多期刊文獻中都有記載，如魏勝非等的報道(魏勝非，陳彩云，許德玄。基于青海弧菌Q67的飲用水取水環境虛擬檢測儀器。東北師范大學報(自然科學版)，2010，42(2)，143～146。)。該菌株本申請人也持有，并且保證可以自本發明申請日起20年內向公眾提供。

本發明將待測樣品稀釋后，按照9：1的比例與相對發光強度為10～30萬RLU的青海弧菌Q67菌懸液混合，靜置反應，測定發光強度，再根據真菌毒素標準品對青海弧菌發光強度影響的標準曲線計算待測梯度稀釋樣品中真菌毒素的含量，選取待測稀釋樣品中真菌毒素含量為1～40μg/ml的作為標準樣，以此標準樣計算樣品中的真菌毒素的含量。按照本發明的方法對待測樣品(固體和液體樣品)進行測定，與液相色譜法測定的結果無顯著差異，測定結果準確度高。本發明的利用青海弧菌Q67檢測真菌毒素的方法中的菌懸液的相對發光強度控制、菌懸液與待測稀釋樣品的配比以及選取待測稀釋樣品中真菌毒素含量為1～40μg/ml的作為標準樣進行計算，這些都是為了使得本發明的方法能夠準確的測定樣品中真菌毒素的含量。本發明由于方法簡單，無需大型儀器設備，測定所需的微弱發光儀設備成本較為低廉，測定結果準確，因此具有簡便、快速、準確的優點，易于普及和推廣應用。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

實施例1：

一、青海弧菌Q67的培養和收集：