[發(fā)明專利]用于檢測血清中CD147的抗體及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710191417.4
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN107167605B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬杰;吳云
• 申請（專利權(quán)）人: 馬杰
• 主分類號(hào): C12N5/12
• 分類號(hào): C12N5/12
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發(fā)明涉及血清抗原檢測技術(shù)，具體涉及一種用于檢測血清中CD147的抗體及試劑盒。提供用于檢測待測血清中肝癌標(biāo)志物CD147的抗體對，其特征在于，由第一抗體和第二抗體組成；所述第一抗體作為包被抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC NO：13587的雜交瘤細(xì)胞分泌；所述第二抗體作為檢測抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC NO：13588的雜交瘤細(xì)胞分泌。所述抗體對特異性強(qiáng)，可以同時(shí)與其他標(biāo)志物抗體聯(lián)合使用，不受干擾地檢測出血清中CD147；靈敏度高，可檢測到濃度低至64pg/ml的CD147，能夠準(zhǔn)確定量血清中的CD147蛋白。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血清抗原檢測技術(shù)，具體涉及一種用于檢測血清中CD147的抗體及試劑盒。

背景技術(shù)

癌癥在全球的發(fā)病率呈上升趨勢。2014年2月3日，世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《全球癌癥報(bào) 告2014》顯示，中國新增癌癥病例高居世界第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人數(shù)均居世 界首位。肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是全球最常見的惡性腫瘤之一，我國是 乙肝大國，肝癌發(fā)病率占全球總數(shù)的55％。臨床上肝癌的診斷主要是通過血清檢測甲胎蛋白 (Alpha-fetoprotein,AFP)，B超發(fā)現(xiàn)肝臟結(jié)節(jié)，然后CT和MRI檢查。然而AFP陽性率約 60～70％，并非所有肝細(xì)胞癌都分泌大量的AFP，約40％早期原發(fā)性肝癌及15％～20％晚期 原發(fā)性肝癌患者的血清AFP水平是正常的，故僅靠AFP診斷肝癌尚有漏診的可能，導(dǎo)致臨 床80％患者確診時(shí)已屬中晚期。中晚期肝癌基本無有效治療方法，對乙肝、肝硬化等高危人 群進(jìn)行肝癌腫瘤標(biāo)志物的篩查和早期診斷是解決肝癌高死亡率的最有效措施。

CD147最早在腫瘤細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)。Biswas等研究表明，腫瘤細(xì)胞表面的CD147可以誘 導(dǎo)臨近的成纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶，而將其命名為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo) 因子。Wang等研究發(fā)現(xiàn)，CD147在腫瘤組織中的表達(dá)陽性率(73.53％)明顯高于癌旁組織 (13.58％)。HAb18G/CD147廣泛表達(dá)于Hep-G2、SMCC-7721、BEL7402等肝癌細(xì)胞系， 但不表達(dá)于L-02人類正常肝細(xì)胞系，且HAb18G/CD147定位于74.0％肝癌患者的腫瘤細(xì)胞 膜。近年有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，血清可溶性CD147在肝癌的早期診斷方面較血清AFP更為敏感，將 血清CD147與血清AFP結(jié)合，有望進(jìn)一步提高肝癌早期診斷的敏感性。

Luminex懸浮芯片技術(shù)是美國Luminex公司在20世紀(jì)90年代中期開發(fā)的一種多功能的 液相芯片分析平臺(tái)，也稱為液體芯片。它有機(jī)地整合了有色微球、激光技術(shù)、最新的高速數(shù) 字信號(hào)處理和計(jì)算機(jī)技術(shù)，應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對不同目標(biāo)分子的特異性抗體，不同 的微球可以自由組合，可以在一個(gè)25-50微升的樣品內(nèi)同時(shí)檢測最多達(dá)100種不同的檢測項(xiàng) 目，具有重復(fù)性與穩(wěn)定性好、高通量、檢測指標(biāo)可靈活選擇，以及高靈敏度和高信噪比等諸 多優(yōu)點(diǎn)，適用于血漿中抗原類蛋白的分析以及重大疾病抗原標(biāo)志物的定量分析，是一項(xiàng)具有 重大意義的醫(yī)學(xué)輔助檢測手段。與傳統(tǒng)的固相芯片相比，克服了固相芯片在大分子檢測時(shí)受 表面張力、空間效應(yīng)等對反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的干擾，使檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性得到很大的提高。

因此，獲得CD147特異性抗體，利用Luminex懸浮芯片技術(shù)對血清中CD147含量進(jìn)行檢測，將有助于提高早期肝癌的檢出率。

發(fā)明內(nèi)容

為了提高早期肝癌的檢出率，本發(fā)明提供用于檢測血清中CD147的抗體及試劑盒，其特 異性強(qiáng)、靈敏度高，能夠準(zhǔn)確檢測出血清中CD147的含量。

請求保護(hù)的技術(shù)方案如下：

用于制備抗CD147的抗體的抗原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所 示。

編碼所述抗原蛋白的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

用于檢測待測血清中肝癌標(biāo)志物CD147的單克隆抗體，其特征在于，由保藏編號(hào)為CGMCC NO：13588的雜交瘤細(xì)胞分泌。