[發(fā)明專利]用于檢測(cè)血清中高爾基糖蛋白73的抗體及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710191226.8
• 申請(qǐng)日: 2017-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN107014997A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬杰;吳云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 馬杰
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11129
• 代理人: 吳泳歷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血清抗原檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種用于檢測(cè)血清中高爾基糖蛋白73的抗體及試劑盒。

背景技術(shù)

癌癥在全球的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。2014年2月3日，世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《全球癌癥報(bào)告2014》顯示，中國(guó)新增癌癥病例高居世界第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人數(shù)均居世界首位。肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是全球最常見的惡性腫瘤之一，我國(guó)是乙肝大國(guó)，肝癌發(fā)病率占全球總數(shù)的55％。臨床上肝癌的診斷主要是通過(guò)血清檢測(cè)甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)，B超發(fā)現(xiàn)肝臟結(jié)節(jié)，然后CT和MRI檢查。然而AFP陽(yáng)性率約60～70％，并非所有肝細(xì)胞癌都分泌大量的AFP，約40％早期原發(fā)性肝癌及15％～20％晚期原發(fā)性肝癌患者的血清AFP水平是正常的，故僅靠AFP診斷肝癌尚有漏診的可能，導(dǎo)致臨床80％患者確診時(shí)已屬中晚期。中晚期肝癌基本無(wú)有效治療方法，對(duì)乙肝、肝硬化等高危人群進(jìn)行肝癌腫瘤標(biāo)志物的篩查和早期診斷是解決肝癌高死亡率的最有效措施。

在早期肝癌診斷中，利用復(fù)合型指標(biāo)對(duì)肝癌進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，能夠提高肝癌診斷符合率，及時(shí)制定和實(shí)施治療方案，延長(zhǎng)患者的生命。高爾基糖蛋白73(Golgi Protein 73，GP73)是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，2000年Kladney研究表明，在正常的人體肝組織中，GP73主要由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，而肝細(xì)胞表達(dá)很少甚至不表達(dá)，但是在有乙型肝炎病毒(HBV)及腺病毒感染的肝組織中，膽管細(xì)胞表達(dá)GP73改變不明顯，而肝細(xì)胞則呈高表達(dá)。2005年Block等發(fā)現(xiàn)，在肝癌患者血清中GP73水平顯著升高。在一項(xiàng)研究中，與肝硬化患者相比，肝癌患者的血清GP73水平顯著升高。在少數(shù)報(bào)道中，GP73診斷肝癌的敏感性可達(dá)69％，特異性可達(dá)90％，對(duì)于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性優(yōu)于AFP。因此，GP73被認(rèn)為是最具潛力的HCC血清標(biāo)志物之一。

Luminex懸浮芯片技術(shù)是美國(guó)Luminex公司在20世紀(jì)90年代中期開發(fā)的一種多功能的液相芯片分析平臺(tái)，也稱為液體芯片。它有機(jī)地整合了有色微球、激光技術(shù)、最新的高速數(shù)字信號(hào)處理和計(jì)算機(jī)技術(shù)，應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對(duì)不同目標(biāo)分子的特異性抗體，不同的微球可以自由組合，可以在一個(gè)25-50微升的樣品內(nèi)同時(shí)檢測(cè)最多達(dá)100種不同的檢測(cè)項(xiàng)目，具有重復(fù)性與穩(wěn)定性好、高通量、檢測(cè)指標(biāo)可靈活選擇，以及高靈敏度和高信噪比等諸多優(yōu)點(diǎn)，適用于血漿中抗原類蛋白的分析以及重大疾病抗原標(biāo)志物的定量分析，是一項(xiàng)具有重大意義的醫(yī)學(xué)輔助檢測(cè)手段。與傳統(tǒng)的固相芯片相比，克服了固相芯片在大分子檢測(cè)時(shí)受表面張力、空間效應(yīng)等對(duì)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的干擾，使檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性得到很大的提高。

因此，獲得特異性強(qiáng)的GP73檢測(cè)抗體，利用Luminex懸浮芯片技術(shù)對(duì)血清中GP73含量進(jìn)行檢測(cè)，將有助于提高早期肝癌的檢出率。

發(fā)明內(nèi)容

為了提高早期肝癌的檢出率，本發(fā)明提供用于檢測(cè)血清中高爾基糖蛋白73的抗體及試劑盒，其特異性強(qiáng)、靈敏度高，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出血清中高爾基糖蛋白73的含量。

請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案如下：

用于檢測(cè)待測(cè)血清中肝癌標(biāo)志物高爾基糖蛋白73的單克隆抗體，其特征在于，由保藏編號(hào)為10B9F11的雜交瘤細(xì)胞分泌。

分泌上述單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，其特征在于，保藏編號(hào)為10B9F11。

用于檢測(cè)待測(cè)血清中肝癌標(biāo)志物高爾基糖蛋白73的抗體對(duì)，其特征在于，由第一抗體和第二抗體組成；所述第一抗體作為包被抗體，由保藏編號(hào)為8F10D1的雜交瘤細(xì)胞分泌；所述第二抗體作為檢測(cè)抗體，由保藏編號(hào)為10B9F11的雜交瘤細(xì)胞分泌。

用于肝癌早期診斷的試劑盒，其特征在于，包括上述單克隆抗體或抗體對(duì)，以及用于免疫檢測(cè)的通用試劑。

所述試劑盒，包括上述抗體對(duì)，所述第一抗體與磁珠偶聯(lián)，所述第二抗體用生物素標(biāo)記，所述用于免疫檢測(cè)的通用試劑為鏈霉親和素-藻紅蛋白。

所述試劑盒，還包括高爾基糖蛋白73的標(biāo)準(zhǔn)品和/或以所述高爾基糖蛋白73的標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線或直線回歸方程說(shuō)明書。

所述試劑盒，還包括洗滌緩沖液和測(cè)定緩沖液。

任一所述的試劑盒，還包括抗甲胎蛋白AFP的抗體、抗α-L-巖藻糖苷酶AFU的抗體、抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF的抗體和/或抗細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子CD147的抗體，及其相應(yīng)的免疫檢測(cè)試劑。