[發(fā)明專利]一種逆轉(zhuǎn)乙型肝炎病毒慢性感染的抗Tim-3抗體和α-galcer的組合及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710191021.X
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN107132357B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬春紅;許勇;杜憲紅;武專昌;梁曉紅;高立芬;王澤華;譚思雨;王體瀟
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;G01N33/576;A61P1/16;A61P31/20;A61K31/7032
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

本發(fā)明公開了一種逆轉(zhuǎn)乙型肝炎病毒慢性感染的抗Tim?3抗體和α?galcer的組合及應(yīng)用。本發(fā)明研究團隊發(fā)現(xiàn)，HBV感染患者CD8+T、NK、iNKT和單核巨噬細胞表面Tim?3均呈現(xiàn)不同程度升高，Tim?3高表達與HBV患者肝固有免疫、適應(yīng)性免疫耐受密切相關(guān)，除α?Galcer外，Tim?3在阻礙HBV清除過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，在α?Galcer活化iNKT的同時，干預(yù)免疫細胞檢查點Tim?3，能逆轉(zhuǎn)HBV肝免疫耐受，實現(xiàn)HBV轉(zhuǎn)歸。本發(fā)明采用抗Tim?3抗體聯(lián)合應(yīng)用α?Galcer可有效清除HBV，顯著降低HBV病毒載量及血清HBsAg及肝組織pgRNA水平。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乙型肝炎生物治療研究領(lǐng)域，尤其涉及一種逆轉(zhuǎn)乙型肝炎病毒慢性感染的抗Tim-3抗體和α-galcer的組合以及α-galcer聯(lián)合抗Tim-3抗體免疫療法在清除乙型肝炎病毒中的作用。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)為嗜肝DNA病毒，HBV感染可誘發(fā)肝臟炎癥反應(yīng)，造成肝細胞損傷。HBV持續(xù)感染可誘發(fā)肝纖維化，甚至肝細胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)，是危害人類身體健康的重要危險因素。

HBV慢性感染與HBV誘導(dǎo)機體發(fā)生肝免疫耐受有關(guān)。慢性感染患者的肝固有免疫細胞，肝適應(yīng)性免疫細胞均處在對HBV低應(yīng)答、甚至無應(yīng)答狀態(tài)，這使HBV產(chǎn)生免疫逃逸并在肝細胞內(nèi)持續(xù)擴增。現(xiàn)有HBV臨床治療方案多傾向于藥物抗病毒療法，但藥物治療只能抑制病毒復(fù)制，并不能徹底清除肝細胞內(nèi)HBV，且長時間藥物治療易對機體產(chǎn)生一定毒副作用并導(dǎo)致HBV耐藥株的出現(xiàn)。而通過干預(yù)免疫檢查點并結(jié)合其他免疫調(diào)節(jié)增強劑的聯(lián)合治療將有助于逆轉(zhuǎn)肝免疫耐受、恢復(fù)機體自身免疫細胞功能、增強免疫細胞活性，在阻斷HBV慢性感染中展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景。

慢性HBV感染的形成機制非常復(fù)雜，關(guān)于細胞免疫的調(diào)控機制原理也一直是學(xué)者們的研究熱點。iNKT(invariant nature killer T)細胞，又稱經(jīng)典型或恒定NKT細胞，同時表達NK細胞表面標(biāo)志以及恒定的Vαl4-Jα18鏈TCR。iNKT細胞，識別由CD1d提呈的脂類抗原分子，可被α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)特異性激活。被活化的iNKT細胞產(chǎn)生多種細胞因子，尤其是IL-4和IFN-γ，參與多種途徑的免疫調(diào)節(jié)。iNKT細胞可以被CD1d-β2m復(fù)合物(第一信號)激活，第二信號既可通過CD28、ICOS等通路傳遞正向活化信號，也可通過CTLA-4、PD-1、Tim-3等通路傳遞負向抑制信號。

作為聯(lián)系機體固有免疫、適應(yīng)性免疫的橋梁，iNKT(Invariant natural killerT)細胞在肝免疫過程中發(fā)揮重要作用。活化iNKT細胞可增強肝固有免疫、適應(yīng)性免疫應(yīng)答。α-Galcer可有效活化iNKT細胞，但臨床研究證實，常用α-Galcer治療劑量可有效活化iNKT細胞并降低HBV DNA病毒載量，但毒性作用太大。而降低α-Galcer劑量雖可降低度副作用，但活化iNKT和抑制HBV復(fù)制的作用卻大大降低，治療效果很不理想。

Tim-3(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule-3)是關(guān)鍵的免疫負調(diào)控分子，與其配體galectin-9相互作用可負向調(diào)控IFN-γ的產(chǎn)生，在誘導(dǎo)機體免疫耐受中發(fā)揮重要作用。Tim-3最初發(fā)現(xiàn)其主要表達于Th1細胞中，但最近研究顯示Tim-3在CD8+T、DC、NK、NKT和單核巨噬細胞等多種免疫細胞上均有表達，并通過影響這些細胞的功能，參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展。靶向Tim-3的免疫療法已在多種腫瘤中展現(xiàn)了很好的治療作用，但目前靶向Tim-3對于逆轉(zhuǎn)HBV慢性感染的作用和機制尚不清楚。

發(fā)明內(nèi)容

基于現(xiàn)有HBV清除方法的缺乏與不足，本發(fā)明闡明抗Tim-3抗體聯(lián)合應(yīng)用α-Galcer清除HBV的可行性，為HBV轉(zhuǎn)歸臨床治療提供理論依據(jù)和治療方案。

具體的，本發(fā)明公開了以下技術(shù)方案：