[發明專利]一種提高病毒糖蛋白溶解性的重組載體及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201710188606.6 | 申請日： | 2017-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN108660153B | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發明（設計）人： | 王弋;劉昕 | 申請（專利權）人： | 廣州源博醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/86;C12N15/62;C12N15/66;C12N5/10;A61K39/12;A61P31/12 |
| 代理公司： | 廣州專理知識產權代理事務所(普通合伙) 44493 | 代理人： | 譚昉 |
| 地址： | 510663 廣東省廣州市廣州科*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 病毒 糖蛋白 溶解性 重組 載體 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種提高病毒糖蛋白溶解性的重組載體，其特征在于，所述重組載體包括骨架載體和插入骨架載體的病毒來源的M蛋白表達框，以及病毒糖蛋白表達框；
所述骨架載體為哺乳動物細胞表達載體和昆蟲細胞表達載體；
所述病毒來源的M蛋白為SEQ ID NO.1所示的PIV3蛋白序列；
所述病毒糖蛋白為SEQ ID NO.2所示的RSV F蛋白序列；
病毒來源的M蛋白表達框和病毒糖蛋白表達框存在兩種插入載體骨架的方式；
插入方法一：重組載體中病毒來源的M蛋白表達框位于載體啟動子下游，病毒糖蛋白表達框位于M蛋白表達框下游，兩者用自剪切基因序列連接；
插入方法二：重組載體中病毒來源的M蛋白表達框位和病毒糖蛋白表達框分別獨立位于單個載體兩個不同啟動子的下游，或者兩者分別位于不同的獨立載體的啟動子下游；
所述自剪切基因為2A序列；
上述的載體中，重組載體中病毒來源的M蛋白表達框位和病毒糖蛋白表達框的序列為宿主細胞的偏好性優化后的密碼子。
2.一種含有權利要求1所述重組載體的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為哺乳動物細胞或者昆蟲細胞，所述哺乳動物細胞為293、CHO或MRC-5的一種，所述昆蟲細胞為SF-9、Hi-5或伊蚊細胞的一種。
3.一種提高病毒糖蛋白溶解性的病毒糖蛋白制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：使用如權利要求1所述的重組載體在宿主細胞中表達，破碎、收集目的蛋白。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括純化步驟，所述純化步驟包括：病毒糖蛋白分別通過分子篩柱、陰離子層析柱、陽離子層析柱進行純化。
5.權利要求1所述的重組載體在表達病毒糖蛋白中的用途，所述病毒糖蛋白用于制備病毒疫苗和抗原。
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