[發明專利]一種加強型人乳頭瘤病毒HPV?16/18的二價DC疫苗

在審

• 申請號: 201710187380.8
• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN106963945A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 劉明錄;李言志;萬磊;強邦明;馮建海;金海峰
• 申請（專利權）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/295;A61K38/19;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所53113
• 代理人: 李松松

技術領域

本發明涉及生物與新醫藥技術領域，更具體的說，是一種加強型人乳頭瘤病毒HPV-16/18的二價DC疫苗。

背景技術

人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，易于感染人類表皮和粘膜鱗狀上皮，是導致宮頸癌和生殖器濕疣以及部分肛門癌、口腔癌的主要因素。持續性感染高危型HPV-16，HPV-18可能引起宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等惡性腫瘤。宮頸癌是目前唯一病因明確的惡性腫瘤，99.7％的宮頸癌病例因HPV感染造成，世界衛生組織及國際癌癥中心也確認高危型HPV病毒持續感染是宮頸癌的主要病因，因此，HPV疫苗又被人們習慣性成為子宮頸癌疫苗。據不完全統計，每年全世界有50萬女性因感染HPV而患宮頸癌，其中20萬死于該腫瘤，HPV病毒與艾滋病、癌癥被世界衛生組織列為人類三大絕癥。

HPV-16/18可導致70％的宮頸癌病例，還可能造成男性和女性的生殖器濕疣,性生活是其傳播的主要渠道，常規的保護措施，比如說避孕套，并不能完全阻斷HPV病毒的傳播，所以說注射疫苗就成了預防HPV最好的方式。

HPV病毒基因組是閉合環狀的雙鏈DNA分子，長約7.2-8kb，編碼8個開放閱讀框(Open Reading Frame)，分為早期轉錄區(Early Region，E區)、晚期轉錄區(Late Region，L區)和控制區(Long Control Region)3個功能區，早期轉錄區長約4.5Kb，編碼六個非結構性早期蛋白：E1，E2，E4-E7，參與病毒的復制、轉錄、翻譯調控和細胞轉化等功能；晚期轉錄區長約2.5Kb，編碼核心衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白L2，組成病毒的衣殼；控制區長約800-900bp，位于E8和L1之間，該區含有HPV基因組DNA的復制起點和HPV基因表達所需的調控元件，負責調控DNA的復制和表達。病毒顆粒由L1、L2衣殼蛋白組成，直徑約45-55nm，呈無包膜的20面體對稱的核衣殼結構，表面有72個殼微粒。

DC俗稱樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)，因成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名，是體內功能最強、唯一能活化靜息T細胞的專職抗原呈遞細胞(Antigen presenting Cells，APC)，能攝取、加工及呈遞抗原，是啟動、調控和維持T細胞介導的免疫反應的中心環節。

目前DC疫苗已應用于部分腫瘤的監視和治療，以DC為基礎的疫苗制備方式主要有以下幾種：(1)抗原多肽致敏的DC，如利用純化或重組的腫瘤特異性抗原多肽致敏DC，這種方法靶向性良好。但目前已經確定的抗原多肽有限，單一的抗原多肽只限定于特定的HLA類型，且腫瘤細胞很容易通過抗原突變逃脫機體針對單一抗原標為的免疫作用。(2)全部抗原致敏的DC，使用病毒感染細胞(或腫瘤細胞)的裂解產物、蛋白提取物、凋亡產物刺激DC，這類疫苗包括了所有的病毒抗原，也易于制備，能夠引發多克隆的CTL免疫應答。但是該方案需要感染組織量較大，而且最佳刺激量難以確定。此外，病毒感染細胞也含有機體自身的抗原，有誘發自身免疫反應的危險。(3)基因轉染DC，即利用編碼病毒抗原的RNA/DNA致敏DC。此方法通過PCR擴增病毒抗原的全部或者部分DNA序列，而后將核酸以病毒或非病毒介導的方法導入DC內，目的抗原可在細胞內形成持久的表達。此法可客服抗原刺激DC后，因抗原-MHC復合物解離或者MHC分子降解對其誘導的免疫應答所產生的不利影響。

DC疫苗不僅能誘導產生大量效應T細胞遷移至病毒感染部位，還能保持效應T細胞在易感染部位的長期存在，起到免疫監視的作用。

發明內容

本發明提供了一種加強型人乳頭瘤病毒HPV-16/18的二價DC疫苗以解決上述背景技術問題的不足之處。

本發明的方案是：

一種加強型人乳頭瘤病毒HPV-16/18的二價DC疫苗，包括經基因修飾的樹突狀細胞，所述經基因修飾的樹突狀細胞中的重組基因序列由粒細胞-巨噬細胞刺激因子、人乳頭瘤病毒HPV-16與HPV-18的L1轉錄區串聯。

作為優選的技術方案，所述的粒細胞-巨噬細胞刺激因子為序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

作為優選的技術方案，所述HPV16的L1抗原序列為序列表SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

作為優選的技術方案，所述HPV18的L1抗原序列為序列表SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。