[發明專利]一株分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法在審
| 申請號： | 201710187180.2 | 申請日： | 2017-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN108660114A | 公開（公告）日： | 2018-10-16 |
| 發明（設計）人： | 潘秀珍;高基民;孫衛平;王長軍;李先富 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍南京軍區軍事醫學研究所 |
| 主分類號： | C12N5/20 | 分類號： | C12N5/20;C07K16/12;C12R1/91 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 夏平 |
| 地址： | 210002 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表面蛋白 豬鏈球菌 分泌 雜交瘤細胞株 單克隆抗體 制備 病原微生物 單克隆抗體細胞株 雌性Balb/c小鼠 免疫學檢測技術 鼠源單克隆抗體 小鼠骨髓瘤細胞 分離脾臟 抗體效價 體內抗體 免疫原 鼠源 小鼠 篩選 融合 | ||
1.一株分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb的單克隆抗體的雜交瘤細胞株2F1，其特征在于該雜交瘤細胞株通過如下方法制備：
(1)采用純化的2型豬鏈球菌05ZYH33的表面蛋白Lmb四次免疫雌性Balb/c小鼠，使小鼠體內抗體達到最高峰時分離脾臟B淋巴細胞；
(2)將步驟(1)分離的脾臟B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合；
(3)以純化后的重組Lmb蛋白為抗原包被ELISA板，使用間接ELISA法篩選陽性克隆；再進一步以重組Sao蛋白為抗原,釆用Western blot法再次驗證篩選得到的陽性克隆；最后通過染色體計數證明篩選得到的陽性克隆，最終獲得雜交瘤細胞株2F1。
2.根據權利要求1所述的分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb單克隆抗體的雜交瘤細胞株2F1，其特征在于：步驟(1)中選用雌性6周Balb/c小鼠，采用完全弗氏佐劑乳化的重組Lmb蛋白為免疫原，注射蛋白量為100μg/只鼠；間隔2周追加免疫共3次，并改為不完全弗氏佐劑乳化，注射蛋白量保持不變；在融合前3天加強免疫一次，注射蛋白量為100μg/只鼠。
3.一種制備分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特征在于包含如下步驟：
(1)采用弗氏佐劑等體積乳化2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb四次免疫雌性Balb/c小鼠，使小鼠體內抗體達到最高峰時分離脾臟B淋巴細胞；
(2)將步驟(1)分離的脾臟B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合；
(3)以純化后的重組Lmb蛋白為抗原包被ELISA板，以重組Lmb蛋白為包被抗原采用間接ELISA法篩選陽性克隆；進一步以重組蛋白Lmb為抗原用Western blot法再次驗證ELISA篩選得到的陽性克隆；最后通過染色體計數證明篩選得到的陽性克隆，最終獲得分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb的雜交瘤細胞株2F1。
4.根據權利要求3所述的制備分泌抗2型豬鏈球菌表面蛋白Lmb的單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特征在于：步驟(1)中選用6周雌性Balb/c小鼠，采用完全弗氏佐劑乳化的重組Lmb蛋白為免疫原，注射蛋白量為100μg/只鼠；間隔2周追加免疫共3次，并改為不完全弗氏佐劑乳化，注射蛋白量保持不變；在融合前3天加強免疫一次，注射蛋白量為100μg/只鼠。
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