[發明專利]一種利用磁性固定化堿性蛋白酶提取蝦殼蛋白的方法

在審

• 申請號: 201710186400.X
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106967772A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 喻亞麗;周運濤;何力;文平;甘金華;呂磊
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 董路,王敏鋒

1.一種利用磁性固定化堿性蛋白酶提取蝦殼蛋白的方法，其特征在于包括如下步驟：

1.1、制備磁性固定化堿性蛋白酶：

1.1.1、將磁性殼聚糖微球加入pH＝9-12的硼砂緩沖液中，再加入堿性蛋白酶，磁性殼聚糖微球、堿性蛋白酶和硼砂緩沖液的比例為1mg:100-400U:0.1-1ml，在0-10℃下反應2-5h，得到混合產物；

1.1.2、向混合產物中加入戊二醛，使戊二醛的終濃度為0.005-0.01g/ml，在0-10℃下反應2-5h，過濾，將濾渣用硼砂緩沖液洗滌，干燥，得到磁性固定化堿性蛋白酶；

1.2、提取蝦殼中的蛋白：

1.2.1、將蝦殼粉加入到濃度為50-90g/L乙酸溶液中，蝦殼粉與乙酸溶液的質量體積比為1g:6-14ml，在55-75℃下反應1-5h，得混合液；

1.2.2、將混合液過濾，向濾渣中加入堿性溶液至體系呈中性，過濾，再用蒸餾水洗滌濾渣，干燥，得改性蝦殼粉；

1.2.3、測定改性蝦殼粉中蝦殼蛋白的含量；

1.2.4、將改性蝦殼粉加入到pH為9-12的硼砂緩沖液中，接著加入磁性固定化堿性蛋白酶，磁性固定化堿性蛋白酶與蝦殼蛋白的比例為10-20U:1mg，在溫度為45-60℃下攪拌酶解1-5小時，酶解結束后，用吸鐵石分離出磁性固定化堿性蛋白酶，將分離出的磁性固定化堿性蛋白酶洗滌后保存備用，再將所得的酶解液過濾，將濾液冷凍干燥，得到蝦殼蛋白多肽，即為蝦殼蛋白粉。

2.根據權利要求1所述的利用固定磁性固定化堿性蛋白酶提取蝦殼蛋白的方法，其特征在于：所述的堿性蛋白酶比活力為20000-32000U/mL。

3.根據權利要求1所述的利用固定磁性固定化堿性蛋白酶提取蝦殼蛋白的方法，其特征在于：所述的堿性溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。