[發明專利]用于快速檢測多種真菌并鑒定菌種的引物和探針及其應用有效
| 申請號： | 201710186226.9 | 申請日： | 2017-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN106987626B | 公開（公告）日： | 2020-12-15 |
| 發明（設計）人： | 任緒義;陳書韻;趙鈴鈴 | 申請（專利權）人： | 杭州迪安生物技術有限公司;杭州迪安醫學檢驗中心有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/725;C12R1/74;C12R1/72;C12R1/68;C12R1/67;C12R1/785;C12R1/80;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 311121 浙江省杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 快速 檢測 多種 真菌 鑒定 菌種 引物 探針 及其 應用 | ||
1.用于快速檢測多種真菌并鑒定菌種的引物和分子信標，其特征在于，它包括如下序列：
(1) 擴增18sV2區的引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1~2 所示；
(2) 擴增18sV9區的引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3 ~4 所示；
(3) 檢測18sV2區擴增子的分子信標，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5 所示；
(4) 檢測18sV9區擴增子的分子信標，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6 所示；
(5) 檢測18sV9區擴增子的分子信標，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7 所示；
上述2對引物對和3條分子信標在一次檢測中共同使用；
所述的真菌包括：白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌、新型隱球菌、曲霉菌屬、毛霉菌屬、青霉菌屬。
2.權利要求1所述的用于快速檢測多種真菌并鑒定菌種的引物和分子信標在制備真菌檢測試劑盒中的應用。
3.用于快速檢測多種真菌并鑒定菌種的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括如下試劑：
(1) 擴增反應試劑：pH=8.00 1M Tris-HCl緩沖液、2M KCl、1.2M MgCl2、dNTPs、NTPs、權利要求1所述的引物和分子信標；
(2) 5×Q-solution：該反應液中含有2.7M甜菜堿、55μg/ml BSA、31.5mM DTT和6.7%DMSO；
(3) 酶反應液：該反應液中含有5.5μg/ml BSA、逆轉錄酶和T7 RNA 聚合酶；
(4)陽性對照：含有8種念珠菌、1種隱球菌、1種曲霉菌、1種毛霉菌、1種青霉菌RNA的水溶液；
所述的念珠菌為：白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌，所述的隱球菌為：新型隱球菌，所述的曲霉菌為煙曲霉，所述的毛霉菌為：總狀毛霉，所述的青霉菌為：繩狀青霉；
(5) 陰性對照：去RNA酶的水。
4.根據權利要求3所述的用于快速檢測多種真菌并鑒定菌種的試劑盒，其特征在于，陽性對照中，每一種真菌RNA濃度為30ng/μL。
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