[發明專利]一種TaqMan?MGB探針法檢測人類ADH1B基因多態性的引物及其應用

在審

• 申請號: 201710186199.5
• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN106868173A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 任緒義;張鋒;周韻
• 申請（專利權）人: 黑龍江迪安醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 丁靜靜,肖明芳

1.一種TaqMan-MGB探針法檢測人類ADH1B基因多態性的引物，其特征在于，包括如下核酸序列：

(1)擴增ADH1B基因rs1229984多態性位點的引物對，其核苷酸序列SEQ ID NO.：1和SEQ ID NO.：2所示；

(2)用于檢測ADH1B基因rs1229984多態性位點的TaqMan-MGB探針，其核苷酸序列SEQ ID NO.：3和SEQ ID NO.：4所示，其中SEQ ID NO.：3在5’末端標記Fam信號，SEQ ID NO.：4在5’末端標記VIC信號；

上述引物對和熒光探針對在一次檢測中共同使用。

2.權利要求1所述的TaqMan-MGB探針法檢測人類ADH1B基因多態性的引物在檢測ADH1B基因多態性中的應用。

3.一種TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權利要求1所述的引物和探針。

4.根據權利要求3所述的TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，包括2x PCR反應混合液，陽性標準品。

5.根據權利要求4所述的TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述2x PCR反應混合液的配方如下：10mM Tris-HCL、2mMMgCl₂、50mM KCL、0.2mM dNTPs、2U/μL Taq DNA聚合酶。

6.一種TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取人外周血基因組DNA；

(2)分別以提取的人外周血基因組DNA和陽性標準品為模板、權利要求1和2中的引物、探針、PCR反應混合液，進行實時熒光定量PCR反應；

(3)根據檢測到的熒光信號值對rs1229984位點進行基因型判定。

7.根據權利要求5所述的TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的方法，其特征在于，步驟(2)中，實時熒光定量PCR反應的擴增體系為：總體積20μL，2x PCR反應混合液10uL，SEQ ID NO.：1 0.2uM，SEQ ID NO.：2，0.2uM，SEQ ID NO.：1 0.2uM，SEQ ID NO.：1 0.2uM，模板DNA 50ng。

8.根據權利要求5所述的TaqMan-MGB探針法用于檢測人類ADH1B基因多態性的方法，其特征在于，步驟(2)中，實時熒光定量PCR反應中的擴增程序為：95℃，2min；95℃，5s，60℃，45s，收集熒光，40個循環。