[發明專利]一株具有阻斷活性的抗尼帕病毒G蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710184873.6
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN108624602B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 曹勝波;李育霖;黃少梅;葉靜;宋云峰;劉學芹;魏燕鳴
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/45
• 分類號: C12N15/45;C07K14/115;C07K16/10;C12N5/20
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發明屬于生物免疫分析技術領域，具體涉及一株具有阻斷活性的抗尼帕病毒G蛋白的單克隆抗體及其應用。本發明經過密碼子優化方法克隆得到尼帕病毒G蛋白基因，該蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第898?1806位堿基位所述的序列，其蛋白質序列如SEQ ID NO：2所示。本發明提供了一種分泌抗尼帕病毒G蛋白且具有一定阻斷活性的單克隆抗體的雜交瘤細胞株15?D11(中國典型培養物保藏中心保藏編號為CCTCC NO.C2016207)。用原核表達并純化的尼帕病毒G蛋白免疫BALB/c小鼠，篩選出一株能穩定分泌抗尼帕病毒G蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞。本發明制備的單抗可用于動物免疫分析技術領域。

技術領域

本發明屬于生物免疫分析技術領域，具體涉及一株具有阻斷活性的抗尼帕病毒G蛋白的單克隆抗體及其應用。

背景技術

尼帕病毒(Nipah virus)是一種新發現的人獸共患病毒，屬副粘病毒科RNA病毒?？梢鹑撕拓i以中樞神經系統、呼吸系統為主要病變的急性、高度致死性的傳染性疾病。

1997年馬來西亞Kinta地區爆發過發熱性腦炎，造成1人死亡。1998年，馬來西亞北部再度引起豬和人類致命性的腦炎，經由接觸病豬組織及體液感染。而且兩次的病患者均為養殖場工人、屠宰場工人以及從事生豬加工的人員。1999年3月新加坡某屠宰場發生發熱性腦炎11例，造成1人死亡，其所屠宰的生豬80％以上來自馬來西亞。此后，在印度和孟加拉國也有爆發此病，給這些國家的畜牧業發展和人民健康造成了嚴重的危害。

尼帕病毒在周邊國家的流行態勢對我國造成了潛在的威脅。我國東南沿海地區和云南地區具有適合尼帕病毒流行的生態壞境和宿主動物，且國內已從南方地區的蝙蝠體內檢測到尼帕病毒的抗體，加上頻繁的貿易往來使得該病傳入我國的可能性不斷增加，一旦爆發該病勢必對我國的養殖業和人民的正常生活造成危害。

目前，該病診斷主要通過臨床診斷結合病毒分離、免疫組化、PCR等技術。這些方法在病原檢測或抗體檢測中各有特點，在該病的診斷中發揮了重要的作用。但如何在此基礎上研制開發純度高、性能穩定且高效快速的檢測試劑，更易在生產實踐中推廣應用的檢測方法是尼帕病毒疾病診斷與防治工作的一個重點。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種尼帕病毒G基因編碼的重組蛋白。

本發明的第二個目的是利用上述重組蛋白制備抗尼帕病毒G蛋白且具有一定阻斷活性的單克隆抗體。

本發明的第三個目的是利用SEQ ID NO：2所示尼帕病毒G蛋白的重組蛋白作為抗原蛋白的應用。

為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：

一種尼帕病毒G蛋白基因，該基因片段包含尼帕病毒的主要抗原表位，經密碼子優化后核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第898-1806位堿基所示(即CDS區)，該基因編碼303個氨基酸殘基，其蛋白質序列如SEQ ID NO：2所示。

本發明還包括利用SEQ ID NO：2所示一種尼帕病毒G蛋白的重組蛋白作為抗原蛋白的應用。

申請人進一步制備了一種單克隆抗體，它是由序列表SEQ ID NO：2所述的尼帕病毒G蛋白的重組蛋白免疫動物后經融合實驗得到的雜交瘤細胞株15-D11所分泌的，申請人將該株雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株15-D11，于2016年12月6日送交中國.武漢.武漢大學中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號為CCTCC NO:C2016207。

上述雜交瘤細胞株15-D11能夠分泌具有阻斷活性的單克隆抗體，該單抗能特異性結合尼帕病毒G蛋白。

本發明的優點在于：本發明提供了抗尼帕病毒G蛋白的單克隆抗體和分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該單克隆抗體特異性強，生物結合活性高，與轉染表達尼帕病毒G蛋白的A549細胞發生反應，而與對照組的A549細胞不發生反應。