[發明專利]體液懸浮細胞DNA提取試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 201710184262.1
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106868000A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 趙國棟;關淼;高珅;馬勇;鄭岷雪
• 申請（專利權）人: 蘇州國科聞普生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 韓飛

1.體液懸浮細胞DNA提取試劑盒，其特征在于：

包括：重懸液、蛋白酶K溶液、RNA酶A溶液、裂解液、沉淀劑、洗滌液A、洗滌液B和DNA溶解液；

所述重懸液選自磷酸鹽緩沖液、生理鹽水、Tris-HCl緩沖溶液、添加EDTA的Tris-HCl緩沖溶液中的一種；

所述裂解液包括主裂解劑與輔助裂解劑；

所述主裂解劑選自2-8mol/L鹽酸胍、2-8mol/L硫氰酸胍、0.1-9.9％SDS或其組合；

所述輔助裂解劑為Triton-100和/或吐溫；

所述的蛋白酶K溶液的濃度為10-19mg/mL；

所述沉淀劑選自3-5mol/L的氯化鉀溶液和或3-6mol/L的硫酸銨溶液；

所述洗滌液A為無水乙醇或95v/v％乙醇溶液；

所述洗滌液B為71-80v/v％乙醇溶液；

所述的DNA溶解液選自去離子水、Tris-HCl緩沖溶液、添加EDTA的Tris-HCl緩沖溶液中的一種；

所述的RNA酶A溶液的濃度為10-30mg/mL。

2.根據權利要求1所述的體液懸浮細胞DNA提取試劑盒，其特征在于：

所述裂解液還包括：DNA酶活性抑制劑和/或粘液清除劑；

所述DNA酶活性抑制劑為氟苯哌苯醚溶液；

所述粘液清除劑為N-乙酰基-L-半胱氨酸溶液。

3.根據權利要求2所述的體液懸浮細胞DNA提取試劑盒，其特征在于：

所述氟苯哌苯醚溶液的濃度為0.1-5mmol/L；

所述N-乙酰基-L-半胱氨酸溶液的濃度為1-10mmol/L。

4.根據權利要求1所述的體液懸浮細胞DNA提取試劑盒，其特征在于：

所述Tris-HCl緩沖溶液的濃度為1-100mmol/L；

所述添加EDTA的Tris-HCl緩沖溶液為1-100mmol/L Tris-HCl溶液和1-10mmol/L EDTA溶液的混合液；

所述Triton-100的濃度為2-8v/v％；

所述吐溫為吐溫20或吐溫60或吐溫80。

5.用權利要求1所述試劑盒提取體液懸浮細胞DNA的方法，其特征在于：

包括以下操作步驟

S1：取0.1-10mL體液，2000-13000rpm離心3-20分鐘；

S2：棄上清，加入1-5mL重懸液；將離心下來的沉淀重懸后2000-13000rpm離心3-20分鐘，棄上清；

S3：加入100-500μL裂解液、2-20μL蛋白酶K溶液、2-20μL RNA酶A溶液，室溫裂解10-30分鐘后-20℃靜置2分鐘；

S4：加入10-200μL沉淀劑，8000-15000rpm離心1-10分鐘；

S5：將上清轉移至新的離心管中，加入200-1000μL洗滌液A，在-20或-80℃溫度下靜置5-60分鐘后8000-15000rpm離心1-10分鐘；

S6：棄上清，加入200-1000μL洗滌液B，8000-15000rpm離心1-10分鐘；

S7：棄上清，室溫干燥1-10分鐘；

S8：加入20-100μL DNA溶解液即可。

6.根據權利要求5所述提取體液懸浮細胞DNA的方法，其特征在于：

所述裂解液還包括：DNA酶活性抑制劑和/或粘液清除劑；

所述DNA酶活性抑制劑為氟苯哌苯醚溶液；

所述粘液清除劑為N-乙酰基-L-半胱氨酸溶液。

7.根據權利要求6所述提取體液懸浮細胞DNA的方法，其特征在于：

所述氟苯哌苯醚溶液的濃度為0.1-5mmol/L；

所述N-乙酰基-L-半胱氨酸溶液的濃度為1-10mmol/L。

8.根據權利要求5所述提取體液懸浮細胞DNA的方法，其特征在于：

所述Tris-HCl緩沖溶液的濃度為1-100mmol/L；

所述添加EDTA的Tris-HCl緩沖溶液為1-100mmol/L Tris-HCl溶液和1-10mmol/L EDTA溶液的混合液；

所述Triton-100的濃度為2-8v/v％；

所述吐溫為吐溫20或吐溫60或吐溫80。

9.根據權利要求5所述提取體液懸浮細胞DNA的方法，其特征在于：

所述洗滌液A和洗滌液B置于-20℃溫度以下預冷處理30分鐘后使用。