[發明專利]一種新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710184107.X
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN108627648A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 宋長緒;王磊;申翰欽;張樂宜;劉艷玲;梁鵬帥;張鵬飛;劉相聰
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;蘇運貞

本發明公開了一種新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒及其應用。本發明的試劑盒組成包括：以重組PCV3 Cap蛋白作為包被抗原的酶標板、PCV3標準陽性血清、PCV3標準陰性血清、酶標二抗、洗滌液、血清稀釋液、底物顯色液A、底物顯色液B和終止液；首次成功研制針對豬圓環病毒III型的新型PCV3 ELISA抗體檢測試劑盒。本發明的試劑盒具有很好特異性和靈敏性，檢測時間短，可同時檢測大量樣品；試劑盒保存時間長，穩定性好，為該病的診斷、檢測和監測等提供了有力的工具。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒及其應用。

背景技術

圓環病毒屬于圓環病毒科圓環病毒屬，其基因組為一個2kb左右的環狀單鏈DNA。圓環病毒可以感染多種動物，包括豬、犬、鴨、雞、狐貍和魚類。圓環病毒主要編碼兩個開放性閱讀框(rep和cap)。眾所周知，有兩個圓環病毒可以感染豬。豬圓環病毒2型(PCV2)感染可以導致不同的臨床疾病，對養豬業造成嚴重的經濟損失，而圓環病毒1型(PCV1)不引起臨床疾病。2015年，美國研究人員通過宏基因組測序，在美國檢測到一個新型圓環病毒(PCV3)，該圓環病毒與皮炎腎病綜合征、繁殖障礙、心肌炎以及多系統炎癥相關。PCV3屬于新發豬重大疫病病原，2016年12月首次出現在中國，該病與仔豬多系統衰竭癥以及母豬流產有關，正給豬養殖業帶來嚴重威脅。2016年12月，華南農業大學宋長緒研究員組在我國首次檢出致病性的新型豬圓環病毒—PCV3-China/GD2016病毒株，通過對PCV3毒株全基因組和其部分基因的遺傳進化研究發現，PCV3與PCV1和PCV2處于不同的進化分支(圖1)，屬于新型的豬圓環病毒(Genome characterization of a porcine circovirus type 3in SouthChina,Changxu Song,Transbound Emerg Dis.2017Mar 13.)。豬圓環病毒III型是嚴重危害我國養豬業的一個豬病，抗體檢測是防控的關鍵，然而目前國內外尚無成熟的、商品化的PCV3的ELISA抗體檢測試劑盒。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒。本發明以重組PCV3抗原(PCV3的Cap蛋白)為基礎，研制靈敏度高、特異性和穩定性好的ELISA抗體檢測試劑盒，可用于PCV3病毒抗體的快速檢測。

本發明的又一目的在于提供所述的新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒，包括：以重組PCV3Cap蛋白作為包被抗原的酶標板。

所述的新型豬圓環病毒3型的ELISA抗體檢測試劑盒還包括：PCV3標準陽性血清、PCV3標準陰性血清、酶標二抗、洗滌液、血清稀釋液、底物顯色液A、底物顯色液B和終止液中的一種或至少兩種。

所述的重組PCV3Cap蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

所述的重組PCV3Cap蛋白來自于豬圓環病毒3型核衣殼蛋白，特別是來自于豬圓環病毒PCV3-China/GD2016病毒株。

編碼所述的重組PCV3Cap蛋白的核苷酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

所述的重組PCV3Cap蛋白通過以下步驟制備得到：

將編碼所述的重組PCV3Cap蛋白的核苷酸序列克隆入表達載體構建重組表達載體；將所述重組表達載體轉入表達系統中進行表達，純化，得到所述的重組PCV3Cap蛋白。