[發明專利]可分泌抗C反應蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞、C反應蛋白檢測試劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710184068.3
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN107022527B
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 陳潔;韓日才;覃素妮;宗雪;龔春喜;林澤萍
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 44224 廣州華進聯合專利商標代理有限公司
• 代理人: 生啟

本發明涉及一種可分泌抗C反應蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞、C反應蛋白檢測試劑及其制備方法和應用。上述C反應蛋白檢測試劑包括第一抗體和第二抗體，第一抗體為抗C反應蛋白的兔多克隆抗體，第二抗體為抗C反應蛋白的單克隆抗體，分泌第二抗體的雜交瘤細胞保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心，保藏號是CCTCC No：C2016218。本檢測試劑的使用兔多克隆抗體與鼠單克隆抗體進行配對，抗體制備方法簡單，實驗結果表明該檢測試劑的特異性好、線性范圍寬。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種可分泌抗C反應蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞、C反應蛋白檢測試劑及其制備方法和應用。

背景技術

C反應蛋白(C-reaction protein，CRP)最早在1930年由Tillet和Francis發現。最初他們觀察到一些急性病人的血清可與肺炎鏈球菌的莢膜C-多糖發生反應，隨后證實能與C-多糖反應的物質是一種蛋白質，因而將這種蛋白質命名為C反應蛋白(C-reactionprotein，CRP)。CRP主要是在白細胞介素(IL-6)等細胞因子調節下，由肝臟合成分泌的一種蛋白質，外周血淋巴細胞亦能合成少量的CRP。CRP以5個相同亞單位形成環狀的五聚體，相對分子量為115KD～140KD。電泳分布在慢γ區帶，有時可以延伸到β區帶，其電泳遷移率易受一些因素影響，如鈣離子及緩沖液成分等。

C-反應蛋白(CRP)是急性時相蛋白中變化最顯著的一種，也是人體感染的一個重要敏感標志物之一。CRP具有激活補體、增強淋巴細胞活性、促進吞噬細胞功能、清除病理性產物、抑制血小板凝集等作用。近年來，大量研究資料表明，CRP作為炎癥因子，雖為非特異性的標志物，但它與某些疾病如感染性疾病、心血管疾病、惡性腫瘤、自身免疫病、抑郁癥等疾病的發生發展存在很大的相關性，具體如下：

1、CRP作為急性時相蛋白在各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗塞、手術創傷、放射性損傷等疾病發作后數小時迅速升高并有成倍增長之勢。病變好轉時又迅速降至正常，其升高幅度與感染的程度呈正相關。

2、CRP與其它炎癥因子的相關性，CRP與其它炎癥因子如白細胞總數、紅細胞沉降率和多形核白細胞等具有密切相關性。CRP與WBC(白細胞)存在正相關。在炎癥反應中起著積極作用使人體具有非特異性抵抗力。在患者疾病發作時CRP可早于WBC而上升，恢復正常也很快，故具有極高的敏感性。

3、CRP可用于細菌和病毒感染的鑒別診斷，一旦發生炎癥CRP水平即升高而病毒性感染CRP大都正常。膿毒血癥CRP迅速升高，而依賴血培養則至少需要48小時，且其陽性率不高。又如CRP能快速有效地檢測細菌性腦膜炎其陽性率達99％。

4、惡性腫瘤患CRP大都升高，如CRP與AFP的聯合檢測可用于肝癌與肝臟良性疾病的鑒別診斷。CRP測定用于腫瘤的治療和預后有積極意義。手術前CRP上升，手術后則下降，且其反應不受放療、化療和皮質激素治療的影響，有助于臨床評估腫瘤的進程。

目前，臨床實驗室測定CRP的常規方法主要有膠乳凝集試驗和免疫濁度法(如散射、透射比濁法,并且已實現了自動化)以及靈敏度和精確度較高的放射免疫測定方法(RIA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和超靈敏的發光法，臨床檢測主要是免疫比濁法。具體如下：

1、免疫濁度法：當可溶性抗原與相應抗體在兩者比例合適時，抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現濁度，如形成的復合物增加，反應液的濁度隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出受檢物的含量。國內CRP試劑盒一般采用免疫比濁法，其優點是操作簡單，特異性強，重復性好，但是免疫學中常因抗原過剩而引起的勾狀效應，導致假陽產生。