[發明專利]一種禽白血病病毒PCR檢測引物組及包括該檢測引物組的試劑盒

在審

• 申請號: 201710184042.9
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106868216A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 羅瓊;陳瑞愛;李延鵬;李慧敏;溫良海
• 申請（專利權）人: 華南農業大學;肇慶大華農生物藥品有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙)44288
• 代理人: 趙賽,袁嘉恩

1.一種禽白血病病毒PCR檢測引物組，其特征在于包括：引物P1、P2、P3和P4；其中P1為上游通用檢測引物；P2為檢測ALV-A亞型病毒的下游引物；P3為檢測ALV-B亞型病毒的下游引物；P4為檢測ALV-J亞型病毒的下游引物。

2.如權利要求1所述的禽白血病病毒PCR檢測引物組，其特征在于，引物P1、P2、P3和P4的核苷酸序列為：

P1:GGATGAGGTGACTAAGAAAG；

P2:GCATTACCACAGCGGTACTG；

P3:GTAAACGCCCGCCGGACT；

P4:CGAACCAAAGGTAACACACG。

3.如權利要求1所述的禽白血病病毒PCR檢測引物組，其特征在于，應用PCR檢測引物組進行擴增的條件為：

采用20μL的反應體系，包括：PCR-Mix 10μL；ddH₂O 7μL；濃度10pmol/μL的上、下游引物各1μL；cDNA 1μL；

設置如下條件進行反應：預變性95℃，4min；再經95℃變性45s，53℃退火35s，72℃延伸1min，30個循環；最后72℃延伸10min。

4.一種診斷試劑盒，其特征在于，包括：如權利要求1-3任一所述的禽白血病病毒PCR檢測引物組、ALV-A亞型病毒陽性對照質粒、ALV-B亞型病毒陽性對照質粒、ALV-J亞型病毒陽性對照質粒和陰性對照。

5.如權利要求4所述的診斷試劑盒，其特征在于，ALV-A亞型病毒陽性對照質粒通過以下制備方法獲得：以ALV-A亞型病毒cDN A為模板，以P1和P2為引物進行PCR擴增，得到838bp的擴增產物，將擴增產物回收并純化后克隆至pMD18-T載體，即得。

6.如權利要求4所述的診斷試劑盒，其特征在于，ALV-B亞型病毒陽性對照質粒通過以下制備方法獲得：以ALV-B亞型病毒cDN A為模板，以P1和P3為引物進行PCR擴增，得到638bp的擴增產物，將擴增產物回收并純化后克隆至pMD18-T載體，即得。

7.如權利要求4所述的診斷試劑盒，其特征在于，ALV-J亞型病毒陽性對照質粒通過以下制備方法獲得：以ALV-J亞型病毒cDN A為模板，以P1和P4為引物進行PCR擴增，得到545bp的擴增產物，將擴增產物回收并純化后克隆至pMD18-T載體，即得。