[發(fā)明專利]J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710183771.2
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106866798B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王永強;曹紅;李曉齊;鄭世軍;陳福勇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K14/15
• 分類號: C07K14/15;A61K39/21;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 11227 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙青朵

本發(fā)明屬于動物疾病檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應用。本發(fā)明所述J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。實驗表明，該抗原表位對J亞群血清有反應同時對AB亞群血清無反應，能夠特異性識別J亞群禽白血病病毒。本發(fā)明所述融合蛋白能夠制成疫苗，刺激受體產(chǎn)生抗體，保護受體抵抗J亞群禽白血病病毒感染。本發(fā)明所述融合蛋白免疫動物可制備J亞群禽白血病病毒特異性抗體。本發(fā)明所述J亞群禽白血病病毒特異性抗體可以與J亞群禽白血病特異性抗原表位特異性識別，開發(fā)檢測試劑盒，用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物疾病檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應用，尤其是J亞群禽白血病病毒GP85型特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及J亞群禽白血病檢測試劑盒。

背景技術(shù)

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)和禽肉瘤病病毒(ASV)引起的禽類腫瘤性疾病，對我國養(yǎng)雞業(yè)危害重大。ALV/ASV可分為A-J 10個亞群，其中A、B和J亞群為發(fā)生于田間雞的外源性病毒。目前該病尚無有效治療手段，主要通過排除陽性雞凈化種群來控制該病傳播。J亞型ALV可水平傳播和垂直傳播，垂直傳遞可導致子代免疫耐受，抗體檢測表現(xiàn)為陰性。同時發(fā)病雞出現(xiàn)急性腫瘤引起死亡，一旦發(fā)現(xiàn)患病需立即處理。AB亞型ALV主要通過垂直傳播影響雞雛質(zhì)量，病雞體重增長緩慢，產(chǎn)蛋量減少。對于J亞型和AB亞型ALV的診斷有助于根據(jù)不同亞群病毒引起的機理和癥狀進行禽白血病的防控，而雞場也可根據(jù)成本和需求對病雞進行分批次處理，減少經(jīng)濟損失。

抗原表位是指位于抗原分子表面具有特殊結(jié)構(gòu)和免疫活性的化學基團，可刺激機體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞并能被其識別的部位，又稱抗原決定簇，禽白血病病毒RNA編碼區(qū)翻譯gag-pol-env。gag基因編碼病毒內(nèi)部結(jié)構(gòu)的核衣殼蛋白主要有P27、P19、P15、P12四種蛋白，P27蛋白在禽白血病毒中高度保守，已根據(jù)P27蛋白開發(fā)出多種禽白血病檢測試劑盒。但只能用于檢測ALV病毒不能區(qū)別各病毒亞群。

Env是囊膜糖基化表面蛋白，水解后形成膜表面蛋白SU(surface glycoprotein)(gp85基因編碼)和跨膜蛋白TM(transmembrane protein)(gp37基因編碼)，gp85決定病毒亞群特異性和宿主范圍，是抗原表位的主要潛在區(qū)域。目前對禽白血病特異性亞群特異性抗原表位的研究工作都是基于gp85蛋白進行。

目前對亞群特異性抗原表位研究的方法局限于對所研究的特定亞群gp85蛋白進行分析，如定位J亞群抗原表位只針對J亞群gp85蛋白進行分析，檢測方法中待測樣品為J亞群特異性血清或ALV-J蛋白制備的鼠單抗，這種方法能找到的J亞群抗原表位但是特異性不強，不能排除找到的抗原表位區(qū)域包含有其他禽白血病亞群的抗原識別位點。在用重組蛋白對不同亞型禽白血病病毒感染血清進行區(qū)分時，由于各亞群gp85蛋白存在一定的同源性，所以無法對禽白血病抗體亞型進行體外診斷。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供J亞群特異性抗原表位，繼而開發(fā)檢測試劑盒用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。

為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

申請人通過比對不同亞群gp85蛋白序列，找到AB亞群和J亞群gp85蛋白的差異性區(qū)域，從差異性區(qū)域篩選來源于AB亞群和J亞群的15個多肽進行合成，精確找到可區(qū)分禽白血病AB亞群和J亞群的多肽，同時免疫實驗分析15個多肽時采用AB亞群特異性血清和J亞群特異性血清為樣本，如某J亞群來源多肽對J亞群血清有反應同時對AB亞群血清無反應即為J亞群特異性抗原表位。相比于以前的研究來說，可找到能區(qū)分AB亞群和J亞群的特異性抗原表位。