[發明專利]一種豬非典型瘟病毒RT-PCR檢測特異性引物、試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201710183401.9
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106801109B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 王東東;歐陽海平;葉敏慧;潘永飛;宋延華
• 申請（專利權）人: 溫氏食品集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州容大知識產權代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發明屬于動物病毒學及分子生物學技術領域，具體涉及一種豬非典型瘟病毒RT?PCR檢測特異性引物、試劑盒及檢測方法。所述特異性引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；所述試劑盒包括所述引物、Prime Script 1 step酶混合物、2×1 step緩沖液和無核酸酶水。本發明還公開了利用所述特異性引物或所述試劑盒檢測豬非典型瘟病毒的方法。本發明引物特異性和靈敏度高，可以于各種臨床樣本中檢測、鑒別出豬非典型瘟病毒，從而可以快捷及時地采取防治措施，減少經濟損失。

技術領域

本發明屬于屬于動物病毒學及分子生物學技術領域，具體涉及一種豬非典型瘟病毒RT-PCR檢測特異性引物、試劑盒及檢測方法。

背景技術

瘟病毒屬屬于黃病毒科，是有囊膜高度變異的RNA病毒，其基因組長度約12.3kb。目前已確定的有4個種：牛病毒性腹瀉1型病毒(BVDV-1)，牛病毒性腹瀉2型病毒(BVDV-2)，豬瘟病毒(CSFV)和邊界病毒(BDV)。另外還有幾種未確定的非典型瘟病毒，包括長頸鹿瘟病毒，羚羊瘟病毒，HoBi樣病毒和Bungowannah病毒。

2015年美國學者在對一份PRRSV陽性樣本做宏基因組學分析時，發現其中有片段與瘟病毒CSFV、BVDV及菊頭蝠瘟病毒(RaPV)預期值(E)從8e-6-1e-88，并具有68％-98％同一性(identity)。他們將這種病毒暫時命名為“Atypical porcine pestivirus，APPV”(BenM.Hause,Emily A.Colin,Lalitha Peddireddi et al,2015.Discovery of a novelputative atypical porcine pestivirus in pigs in the USA.Journal of GeneralVirology,96,2994-2998.)。

2016年，德國學者從先天性震顫的仔豬小腦以及外周神經檢測到APPV核酸，而健康仔豬未檢測到，從而提出新生仔豬先天性震顫可能與APPV存在一定關聯。另一篇德國學者的研究表明，APPV在德國豬群中有較高的感染率，并且在一株特殊的PK-15細胞上可以檢測到病毒復制(M.Beer,K.wernike,C.et al.2016.High Prevalence of HighlyVariable Atypical Porcine Pestiviruses Found in Germany.Transbound and EmergDiseases，doi:10.1111/tbed.12532.)。

這些發現可能有助于對仔豬先天性震顫發病原因的理解，國外多采用PCR方法對該病毒進行檢測，但該病毒屬于RNA病毒，基因序列變異快，不同毒株間基因序列差異大，NCBI目前登陸序列同源性也僅88.1％-90.9％，國外建立的PCR方法在國內適用性不強，且國內尚無針對該病毒的檢測方法出現。

由此可見，現有技術還存在較大不足。

發明內容

鑒于此，有必要針對上述問題提供一種豬非典型瘟病毒PCR檢測特異性引物、試劑盒及檢測方法，對豬非典型瘟病毒進行快速、準確地鑒別。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種豬非典型瘟病毒RT-PCR檢測特異性引物，核苷酸序列如下：

上游引物F：ctcacyagtgatgggtggga(SEQ ID NO:1)，其中，y代表：c或者t；

下游引物R：cctatyttcttcatgaayaccatggc(SEQ ID NO:2)，

其中，y代表：c或者t。

一種豬非典型瘟病毒的檢測試劑盒，，包括所述的豬非典型瘟病毒RT-PCR檢測特異性引物。