[發明專利]一株高效轉化甘草酸生產GAMG的東鄉野生稻內生真菌及其應用

有效

• 申請號: 201710182857.3
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106701604B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 朱篤;崔瓊瓊;肖依文;吳文婷;汪涯;常軍;張志斌
• 申請（專利權）人: 江西科技師范大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/56;C12R1/645
• 代理公司: 南昌華成聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 36126
• 代理人: 黃晶

1.球毛殼菌Chaetomium globosum DX-THS3在生產GAMG中的應用，其中，所述球毛殼菌Chaetomium globosum DX-THS3已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2016年1月4日，保藏號為CCTCC NO:M 2016005。

2.如權利要求1所述的應用，其特征是，包括以下步驟：

1)將球毛殼菌Chaetomium globosum DX-THS3接種到PDA斜面培養基上進行活化培養5~7天，然后用接種環挑取一環菌種接入到已滅菌的種子培養基中，置于溫度為28~30℃、轉速為120~160r/min的搖床中，連續培養3~5天，即至菌體的對數生長期；

2)按照1~10％ w/v的接種量把上述培養好的種子接種至含甘草酸鹽或甘草粗提物的轉化培養基中，轉化生產GAMG至含量恒定；

3)從發酵液中分離純化GAMG；

其中，轉化培養基的成分及配比為：甘草酸鹽或甘草粗提物1.0~5.0g/L，KH₂PO₄ 1.2~3.2g/L，蛋白胨2.0~5.0g/L，NaCl 0.5~1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25~0.5g/L，CaCl₂ 0.011~0.11g/L，ZnSO₄·7H₂O 2.87mg/L，MnSO₄·H₂O 1.69mg/L，H₃BO₃ 0.03mg/L，純水1000mL，調節pH5.0~6.0，121℃高壓蒸汽下滅菌30min；其中甘草酸鹽或甘草粗提物是菌體產β-D-葡萄糖醛酸苷酶的誘導劑。

3.如權利要求2所述的應用，其特征是，在步驟1)中種子培養基的成分及配比為：葡萄糖5.0~20.0g/L，KH₂PO₄ 1.2~3.2g/L，NH₄NO₃ 2.0~5.0g/L，NaCl 0.5~1.0g/L，酵母粉0.05~0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25~0.5g/L，CaCl₂ 0.011~0.11g/L，ZnSO₄·7H₂O 2.87mg/L，MnSO₄·H₂O 1.69mg/L，H₃BO₃ 0.03mg/L，純水1000mL，調節pH5.0~6.0，121℃高壓蒸汽下滅菌30min。

4.如權利要求2所述的應用，其特征是，在步驟2)中培養條件為：溫度28~36℃、轉速120~180r/min；在步驟2)中的甘草酸鹽為甘草酸、甘草酸銨鹽、甘草酸鈉鹽或甘草酸鉀鹽；甘草粗提物為甘草水提物或甘草醇氨提物。

5.如權利要求2所述的應用，其特征是，在步驟3)中GAMG的分離純化，包含以下步驟：布氏漏斗抽濾，收集發酵液，用石油醚等體積萃取2次，每次2小時，水相用氯仿等體積萃取兩次，每次2小時，水相繼續用乙酸乙酯等體積的萃取兩次，每次2小時；得到的乙酸乙酯相減壓濃縮即為GAMG粗品，然后再用中壓柱層析或制備液相方法進一步分離純化得到GAMG。