[發(fā)明專利]柯薩奇病毒A6型感染動物模型及其制備方法與應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN106867974A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張振杰;史衛(wèi)峰;董兆鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 泰山醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01K67/027;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，柯薩奇病毒A6型感染動物模型及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

柯薩奇病毒(Coxsackievirus，CV)為單股正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬。柯薩奇病毒顆粒為二十面體立體對稱，呈球形，直徑約23～33nm，核衣殼裸露，無包膜和突起；柯薩奇病毒基因組只包含一個(gè)開放閱讀框架(ORF)，編碼一個(gè)較長的多聚蛋白前體。該ORF依次分為P1、P2和P3 3個(gè)區(qū)，其中P1區(qū)編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白VP1～VP4，組成病毒衣殼。P2和P3區(qū)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白。

柯薩奇病毒是引起兒童手足口病(HFMD)的主要病原體，尤其是3歲以內(nèi)的嬰幼兒，能夠?qū)е缕鋰?yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。引起HFMD的腸道病毒(EVs)主要包括四種類型：EV-A、EV-B、EV-C和EV-D。柯薩奇病毒A6型(CVA6)屬于腸道病毒A組，共16個(gè)亞型，其中亞型A組11個(gè)和B組5個(gè)。根據(jù)基因型的不同，CVA6劃分為A～E五個(gè)分支，E基因型又分為E1和E2基因亞型。自2008年CVA6首次爆發(fā)于芬蘭以來，E2亞型成為世界范圍內(nèi)流行的主要基因型。臨床數(shù)據(jù)表明，相比經(jīng)典的HFMD病例，E2亞型CVA6感染人后往往會導(dǎo)致更嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。更重要的是，該病毒感染會導(dǎo)致嚴(yán)重的皰疹性咽峽炎，甚至引起新生兒的死亡。同時(shí)，該亞型病毒在流行季節(jié)很容易跟其它型腸道病毒混合感染，給疾病的治療和診斷帶來很多困難。

在2010年之前，HFMD主要由EV71和CA16兩種類型腸道病毒引起，關(guān)于CVA6的報(bào)道非常少。近幾年，CVA6在全世界范圍內(nèi)流行，尤其是泛太平洋地區(qū)，包括中國臺灣、新加坡、日本和泰國等，很多地區(qū)CVA6已取代EV71和CA16成為導(dǎo)致HFMD的主要流行株。自2011至2015年，歐洲和北美等其它國家和地區(qū)流行的腸道病毒也是CVA6。目前，在中國大陸的很多城市CVA6呈現(xiàn)爆發(fā)式流行，比如深圳、上海和青島等地，其發(fā)病率和死亡率逐年升高。所以，E2型CVA6已逐漸成為在全世界范圍內(nèi)流行且能導(dǎo)致嚴(yán)重并發(fā)癥的HFMD病原體。

由于其它型腸道病毒(非EV71和非CA16)所引起的臨床表現(xiàn)輕微，致病性較弱，并未引起人們對CVA6的關(guān)注。最近的報(bào)告表明，近期流行的E2型CVA6感染會導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)急性并發(fā)癥，如無菌性腦膜炎、腦干腦炎、和急性弛緩性麻痹等。目前關(guān)于手足口病的發(fā)病機(jī)制還不清楚，特別是CVA6的致病機(jī)理尚未報(bào)道，篩選抗CVA6藥物和疫苗缺乏穩(wěn)定的動物感染模型，抗CVA6藥物和疫苗的開發(fā)也受到制約，究其原因缺乏一合適的CVA6感染動物模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何治療和/或預(yù)防柯薩奇病毒A6型所致疾病。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了一種柯薩奇病毒A6型感染動物模型的制備方法。

本發(fā)明所提供的柯薩奇病毒A6型感染動物模型的制備方法，包括：將柯薩奇病毒A6型毒株感染動物，得到柯薩奇病毒A6型感染動物模型；

所述柯薩奇病毒A6型毒株可為在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC No.13393的毒株，該毒株的名稱為WF057R。

上述方法中，所述動物可為哺乳動物。所述哺乳動物具體可為小鼠。所述小鼠具體可為ICR小鼠。

上述方法中，所述動物可為3-5日齡動物。

上述方法中，所述柯薩奇病毒A6型毒株感染所述動物的量可為10^5.5TCID₅₀/(3.5-4.5g)。所述柯薩奇病毒A6型毒株感染所述動物的量具體可為10^5.5TCID₅₀/4g。

上述方法中，所述將柯薩奇病毒A6型毒株感染動物可通過注射的方式進(jìn)行。所述注射可為肌肉注射或腹腔注射。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了利用所述方法制備的柯薩奇病毒A6型感染動物模型在篩選抗柯薩奇病毒A6型藥物和/或疫苗中的應(yīng)用。

本發(fā)明篩選了一株具有代表性的CVA6毒株WF057R，利用本發(fā)明的CVA6毒株WF057R還可以構(gòu)建穩(wěn)定且重復(fù)性好的柯薩奇病毒A6型感染動物模型，該模型可為下一步進(jìn)行藥物的抗病毒治療和評估病毒滅活疫苗的免疫保護(hù)效果提供研究工具。

生物材料保藏說明

生物材料的分類命名：柯薩奇病毒A6型(Coxsackievirus)