[發(fā)明專利]對樣品中的靶分子進行檢測和定量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710181856.7
• 申請日: 2012-03-19
• 公開（公告）號: CN107179349A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 喬納森·斯陶貝爾;法比安·帕默拉爾;大衛(wèi)·博內爾;格雷戈里·阿姆
• 申請（專利權）人: IMA生物科技公司
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司11219
• 代理人: 楊青,穆德駿

本申請為國際申請日2012年3月19日、國際申請?zhí)?PCT/EP2012/054768于2013年9月23日進入中國國家階段、申請?zhí)?201280014694.3、發(fā)明名稱“對樣品中的靶分子進行檢測和定量的方法” 的分案申請。

技術領域

本發(fā)明涉及一種通過質譜法對樣品中的至少一種靶分子進行檢測 和定量的方法。更具體地，本發(fā)明提供一種直接在樣品表面上通過使 用質譜法成像、特別是基質輔助的激光解吸/電離(MALDI)成像對靶 分子進行檢測和定量的方法。

通常，本發(fā)明可以應用在其中對樣品中的分子進行定量是有用或 必要的任何領域中。本發(fā)明可以應用在例如藥物領域中以對藥物在各 種生物組織中的分布和藥動學進行研究。另外，本發(fā)明可以應用在農 業(yè)化學領域中，特別是用于對諸如除草劑的分子在植物和/或環(huán)境(土 壤、周圍地下水等)中的毒性和降解進行評估。

背景技術

質譜法是化學和生物化學分析中廣泛已知并用于檢測和鑒定樣品 中的目標分子的技術。近年來已經開發(fā)了質譜法分子成像例如MALDI 成像，使得可以直接在生物組織切片上將目標分子的分布可視化。 MALDI成像，由于其高靈敏度，使得可以直接在樣品表面上將非常大 量的不同分子的分布同時可視化。在藥物領域中，這種技術使得例如 可以對處理期間各種時間點處各種器官中的分子分布進行比較。

然而，如果希望對在時間t處由此檢測到的分子進行定量，則需 要將該成像技術通過傳統(tǒng)方法或儀器方法與定量化學分析進行偶聯(lián)。 該第二定量步驟可能是處理和解釋錯誤的來源。而且，它不能使目標 分子的存在與其在樣品中的定量分布直接關聯(lián)。

發(fā)明內容

本發(fā)明提出一種在單一分析期間通常使用質譜法來檢測并任選地 定量樣品中的靶分子的方法。優(yōu)先地，本發(fā)明的方法使用質譜法成像， 所述質譜法成像使得能夠直接在樣品上自動獲取與分子的質譜相關的 信號，從而重建所述靶分子在樣品中的分布圖像和至少相對量。

為此，根據(jù)本發(fā)明，對靶分子的消光系數(shù)(TEC)(對給定樣品 中的每種靶分子特異性的)進行限定并將其整合到所述方法中。事實 上，在給定濃度下的給定分子不發(fā)出相同強度的信號，這依賴于所檢 測的分子所處在其中的樣品。類似地，給定樣品中相同濃度的兩種不 同分子具有不同的信號強度。TEC的計算和整合使得可以識別并考慮 到與待分析的樣品中靶分子的質譜相關的信號強度變化。然后，可以 使用TEC對所述分子得到的信號進行歸一化，從而使其代表其濃度， 與樣品的性質及其在所述樣品中的位置無關。由此可以根據(jù)所得到的 分析樣品中靶分子的質譜法結果直接對分子進行定量。

由此本發(fā)明的一個目的涉及通過質譜法對樣品中的至少一種靶分 子進行鑒定和/或定量的方法，所述方法包括以下步驟：

a)將待分析的樣品沉積在支持物上；

b)通過質譜法對所述樣品進行分析，從而得到所述樣品中靶分子 的質譜；

c)通過對靶分子和樣品特異性的消光系數(shù)(TEC)對與所述樣品 中靶分子的質譜相關的信號進行加權；以及任選地

d)使用靶分子的加權信號來確定樣品中靶分子的量。

本發(fā)明的方法可以應用于能夠通過質譜儀分析的任何類型的樣 品，無論所述樣品為有機或無機的液體或固體。本發(fā)明的方法還適用 于質譜法中可使用的任何類型的支持物(載玻片、板、膜等)。所述 方法由此特別適用于分析生物組織。在此情形中，制備組織切片，典 型地在數(shù)微米厚的數(shù)量級上，并將其沉積在支持物如載玻片上，使其 能夠引入質譜儀中。本發(fā)明的方法還可以用于分析所有生物液體如血 液、血漿、血清、唾液、腦脊液、尿等。本發(fā)明的方法還可以用于分 析環(huán)境樣品如土壤、水、植物等的樣品。

在步驟a)期間，可以通過任何已知技術即手動(例如利用移液管) 或自動(例如通過使用成斑裝置或通過噴霧或升華)地沉積樣品。可 以在沉積到樣品支持物上之前對樣品進行稀釋或處理。

可以通過任何質譜法、特別是使用直接質譜法(MS)或串聯(lián)質譜 法(MSⁿ、MRM、SRM)進行靶分子的分析的步驟b)。

對實驗參數(shù)例如質量范圍和/或激光強度進行有利設定，從而在強 度、靈敏度和分辨率方面優(yōu)化靶分子的檢測。

然后獲取質譜。

對于步驟c)，各種光譜特性可以被用作信號，特別是質譜的峰強 度、信噪比(S/N)、峰面積等。