[發明專利]一種Cas9/RNA系統及其應用

在審

• 申請號: 201710181691.3
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN107304435A
• 公開（公告）日: 2017-10-31
• 發明（設計）人: 徐健;王勤濤;路延篤;辛一;魏力
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N9/22;C12R1/89
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 李穎,周秀梅

1.一種Cas9/RNA系統，其特征在于：Cas9/RNA系統為篩選標記、Cas9蛋白基因和RNA的編碼DNA；其中，Cas9蛋白基因為：編碼與RNA結合并對目的基因進行敲除的蛋白質基因；RNA的編碼DNA為能夠指導Cas9蛋白進行基因切割的RNA的編碼DNA。

2.按權利要求1所述的Cas9/RNA系統，其特征在于：所述Cas9蛋白基因為經過密碼子優化并能完整編碼的Cas9蛋白的基因；RNA的編碼DNA為一條或者兩條能與Cas9蛋白結合構成二級結構，并指導Cas9蛋白對目的位置或隨.機目的位置剪切的RNA的編碼DNA。

3.按權利要求1或2所述的Cas9/RNA系統，其特征在于：所述Cas9核苷酸序列如SEQ NO:1所示。

4.一種權利要求1所述的Cas9/RNA系統的應用，其特征在于：所述Cas9/RNA系統在原核、真核或病毒的定點基因或隨機基因改造中的應用。

5.按權利要求1所述的Cas9/RNA系統的應用，其特征在于：所述Cas9/RNA系統在制備目的基因被敲除的原核、真核或病毒定點或隨機突變中的應用。

6.按權利要求5所述的Cas9/RNA系統的應用，其特征在于：所述Cas9/RNA系統在制備目的基因被敲除的原核、真核或病毒定點連續或隨機連續突變中的應用。

7.一種權利要求1所述的基于Cas9/RNA系統的載體，其特征在于：載體為所述Cas9/RNA系統插入骨架載體的限制性內切酶位點，得到載體。

8.一種權利要求6所述的基于Cas9/RNA系統的載體的應用，其特征在于：所述載體在原核、真核或病毒的定點基因或隨機基因改造中的應用。

9.按權利要求6所述的基于Cas9/RNA系統的載體的應用，其特征在于：所述載體在在制備目的基因被敲除的原核、真核或病毒定點連續或隨機連續突變中的應用。

10.一種藻類基因改造的方法，其特征在于：將所述Cas9/RNA系統或載體導入藻株中，使系統中Cas9蛋白在RNA的指導下，對藻株中核酸序列的待敲除目的基因位點或隨機位點進行酶切，酶切后的核酸序列自我修復過程中實現目的位點突變或隨機位點突變，而后通過nPCR/RE-NGS聯合方式確定突變株；

或，酶切后的核酸序列自我修復，進行目的位點或隨機位點突變，而后隨著藻株細胞傳代培養過程中，實現目的位點或隨機位點的連續不斷突變，而后通過nPCR/RE-NGS聯合方式確定突變株。