[發明專利]一種從蛋白核小球藻中提取蛋白質的方法在審
| 申請號： | 201710181267.9 | 申請日： | 2017-03-24 |
| 公開（公告）號： | CN106893676A | 公開（公告）日： | 2017-06-27 |
| 發明（設計）人： | 張學武;張睿林 | 申請（專利權）人： | 時代生物科技（深圳）有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/12 | 分類號： | C12N1/12;C12R1/89 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 518115 廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蛋白 小球藻 提取 蛋白質 方法 | ||
1.一種從蛋白核小球藻中提取蛋白質的方法，包括如下步驟：
(1)、乙醇浸泡小球藻：稱取原料小球藻2g，加入40 ml的乙醇室溫25℃浸泡24 h，后離心去除用水沖洗3-4次離心；
(2)、保留步驟(1)得到的離心上清液和離心沉淀；
(3)、纖維素酶處理：取步驟(1)的離心沉淀加入20ml水，用NaH2PO3 緩沖溶液調整pH5.0-5.5，加入纖維素酶1%，在水浴50℃中酶解3h，后100℃滅酶10min；
(4)、超聲處理：往步驟(3)的產物中加入50ml水后，經超聲破碎蛋白核小球藻細胞；
(5)、剪切處理：將步驟(4)的產物用超高速細胞剪切儀剪切，破碎蛋白核小球藻細胞；
(6)、取步驟(5)的產物，離心用水沖洗3-4次后收集離心上清液；
(7)、合并步驟(2)和步驟(6)獲得的離心上清液。
2.根據專利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中的乙醇濃度為75%。
3.根據專利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)和步驟(6)中離心時的離心轉速為5000r/min，時間為10min。
4.根據專利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中超聲處理的超聲功率為1000W，時間為24min。
5.根據專利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(5)中剪切處理的剪切速度為8000r/min，時間為10min。
6.根據權利要求1～5中任一權利要求所述的方法，其特征在于：所述方法還包括對步驟(1)和步驟(6)中所得的離心上清液用微量法96孔板測定蛋白的提取率和用BCA試劑盒測蛋白含量的步驟。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，對步驟(1)和步驟(6)中所得的離心上清液用BCA試劑盒測蛋白含量的具體過程為：將上清液稀釋20倍，取10μL稀釋液用BAC試劑盒在562nm波長下測其中的蛋白含量，及全波掃描吸光度。
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