[發(fā)明專利]一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710181106.X
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106754392A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設計）人: 孟丹;趙輝
• 申請（專利權）人: 天津商業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司12107
• 代理人: 仝林葉

1.一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征是，按照以下步驟進行：將平板上劃有瀕死亡狀態(tài)的衣藻的瓊脂塊用手術刀切下，將瓊脂塊轉移到裝有液體TAP培養(yǎng)基的小錐形瓶中，23±0.5℃，放置到搖床上避光搖晃過夜，搖床的轉速為90rpm，次日放到23±0.5℃，8000Lx光強下，14h光照/10h避光的光周期培養(yǎng)環(huán)境中振蕩培養(yǎng)24h，搖床的轉速為180rpm；然后取不含瓊脂塊的上清培養(yǎng)基涂布到含有50μg/ml抗菌劑的TAP固體培養(yǎng)基上，放置到23±0.5℃，8000Lx光強下，14h光照/10h避光的光周期培養(yǎng)5-15天，即可獲得活化好的藻株克隆。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征是：所述實驗藻種為：萊茵衣藻，即Chlamydomonas reinhardtii。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征是：所述TAP液體培養(yǎng)基為：Tris 2.42g/L，TAP鹽溶液25ml/L，磷酸鹽溶液0.375ml/L，微量金屬元素溶液1ml/L，冰醋酸1ml/L，121℃高壓蒸汽滅菌30min；所述TAP固體培養(yǎng)基為在液體培養(yǎng)基配置時加入15g/L的瓊脂粉后，121℃高壓蒸汽滅菌30min，倒平板。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征在于，所述的TAP鹽溶液為：NH₄Cl 15g/L，CaCl₂·2H₂O 2g/L，MgSO₄·7H₂O 4g/L；所述的磷酸鹽溶液為：KH₂PO₄ 144g/L，K₂HPO₄ 288g/L；Hutner Trace Metal微量元素溶液為：EDTA二鈉鹽50g/L，H₃BO₃ 11.4g/L，ZnSO₄·7H₂O 22g/L，CoCl·6H₂O 1.61g/L，MnCl₂·4H₂O 5.06g/L，CuSO₄·5H₂O 1.57g/L，(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 1.1g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 4.99g/L，用KOH或者HCl調節(jié)pH至7.0。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征是：在TAP平板中加入的抗菌劑為多菌靈，使用的終濃度為50μg/ml，在上述TAP固體培養(yǎng)基滅菌前加入。

6.根據(jù)權利要求5所述的一種活化瀕死亡狀態(tài)萊茵衣藻的方法，其特征是：配置TAP固體培養(yǎng)基時，先將多菌靈加入到TAP培養(yǎng)基的冰醋酸成分中溶解后，再進行培養(yǎng)基的配置。