[發明專利]使用同一脂肪細胞聯合分析細胞增殖和沉脂能力的方法

有效

• 申請號: 201710181035.3
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106834411B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 文杰;趙桂蘋;崔煥先;劉冉冉;李慶賀;鄭麥青
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N15/10
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馮慧云

使用同一脂肪細胞聯合分析細胞增殖和沉脂能力的方法，包括培養的前脂肪細胞或脂肪細胞使用MTT工作液染色0.5?2h；棄去MTT工作液后DMSO萃取，酶標儀490nm波長讀取OD值；完全棄去DMSO萃取的液體，PBS清洗后加入4％多聚甲醛固定細胞0.5?1h，PBS清洗后加入0.5％油紅O染液染色0.5?1h；棄去油紅O染液，PBS清洗后加入異丙醇萃取，酶標儀510nm波長讀取OD值。本發明解決了脂肪細胞體外研究中一直使用相同批次細胞分別檢測脂肪細胞增殖和沉脂能力導致的數據不夠精準的問題。既提高了數據的準確性，又節省了人力和實驗費用?？蓱糜隗w外研究不同物種、不同組織部位來源的前體脂肪細胞分化、脂肪細胞沉脂能力及相關的分子調控機理，以及相關營養素或藥物的篩選研發中應用。

技術領域

本發明涉及細胞學領域，具體涉及一種使用同一脂肪細胞聯合分析細胞增殖和沉脂能力的方法。

背景技術

動物脂肪主要分布在內臟周圍、皮下和肌肉等組織部位。對于人類而言，過多的脂肪沉積會引起一系列的疾病。對于畜禽而言，腹部脂肪蓄積過多會降低飼料的利用效率，也會額外增加加工費用，并造成一定的環境污染；而在一定范圍內的肌內脂肪含量則會提高肉的品質。因此，脂肪代謝是相關領域的一個研究熱點和難點。體外的細胞培養和研究，是生物科學領域的重要內容之一。尤其是在一些不容易獲得組織材料或不方便直接開展活體實驗的物種，體外細胞水平的研究更是在推進科學進展等方面起了不可或缺的重要作用。

一直以來，在前體脂肪細胞增殖和分化，以及脂肪細胞沉積脂肪等研究方向，為了測定細胞的脂肪沉積量，需要保證檢測的細胞數量相同。以往的做法是直接在細胞鋪板時調整細胞密度一致，由于技術的限制和培養過程中的其他因素影響，極易造成細胞數量不同。為了確保數據的準確性，研究者往往在現實操作中使用同批次的2板細胞分別測定細胞數目和脂肪含量兩個指標，用以標定和比較單位細胞數目的細胞中的脂肪含量。但是，基于上述研究技術的局限，檢測2板細胞的數目也無法保證完全相同。這樣，造成了實驗數據的不準確或實驗誤差大的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種使用同一脂肪細胞聯合分析細胞增殖和沉脂能力的方法，該發明方法解決了脂肪細胞體外研究中一直使用相同批次細胞分別檢測脂肪細胞增殖和沉脂能力導致的數據不夠精準的問題?？蓱糜隗w外研究不同物種、不同組織部位來源的前體脂肪細胞分化、脂肪細胞沉脂能力及相關的分子調控機理，以及相關營養素或藥物的篩選研發中應用。

為了解決上述問題，本發明提出以下技術方案：一種使用同一脂肪細胞聯合分析細胞增殖和沉脂能力的方法，其特征在于，它采用同一脂肪細胞，先MTT法檢測細胞增殖，然后用油紅O染色檢測細胞沉脂能力。

該方法的具體步驟如下：

(1)棄去6孔細胞培養板中前脂肪細胞或脂肪細胞的培養基，PBS漂洗3遍，加入體積比10％的MTT工作液2mL，于二氧化碳培養箱中孵育0.5-2h至細胞染色完全，完全棄去MTT工作液；

(2)加入0.5-1mL的DMSO于搖床輕微振蕩混勻10min，顯微鏡下觀察至細胞染色褪去，然后取96孔酶標板，每孔加入150μL混勻后的液體，酶標儀490nm波長讀取OD值；

(3)完全棄去6孔細胞培養板中DMSO萃取的液體，PBS清洗細胞2-3次；1mL4％多聚甲醛固定細胞0.5h；PBS清洗細胞2-3次；加入0.5％油紅O染液0.5-1mL，室溫染色0.5-2h；

(4)棄去油紅O染液，PBS清洗細胞3次，倒置顯微鏡拍照；加入1mL異丙醇，搖床輕微振蕩混勻10min；取96孔酶標板，每孔加入150μL混勻后的液體，酶標儀510nm波長讀取OD值。

優選的，步驟(1)中將MTT染色的細胞于二氧化碳培養箱中孵育時間為1h。

優選的，步驟(2)中加入的DMSO為1mL。