[發明專利]一種轉基因小麥和棉花的檢測方法

在審

• 申請號: 201710179658.7
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN106755557A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 張鵬;宋智斌;王萌竹;肖林霞;李倩
• 申請（專利權）人: 青島捷安信檢驗技術服務有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于轉基因檢測技術領域，具體涉及一種轉基因小麥和棉花的檢測方法。

背景技術

自1983年世界首例轉基因植物問世以來，商品化轉基因植物逐漸增多，由此衍生出來的轉基因食品也越來越多。轉基因食品是由轉基因生物生產和加工形成的。從人體安全方面來看，基因的某種轉移也許會產生新的毒素和過敏原，引起意想不到的中毒或過敏反應，這種食品某些營養成分或營養質量可能產生變化，使人體出現某種病癥，而且疾病可能有很長時間的潛伏期，且毒性物質對人體的危害也需要一個積累的過程才能實現。因此其安全性問題引起了全世界的普遍關注。我國為此也制定了《農業轉基因生物安全管理條例》，并考慮對轉基因食品進行標簽標識。對轉基因食品貼示標簽，區分轉基因與非轉基因食品，或對食品中轉基因含量的多少加以限制，這都需要有準確、有效的檢測方法。隨著轉基因產品的不斷市場化，建立有效的檢測方法，是進一步加強我國在轉基因食品監管方面的重要技術保障。常用的轉基因檢測方法主要有兩大類：一類是蛋白質水平的檢測，如酶聯免疫法(ELISA法)和膠體金試紙法。另一類是核酸水平的檢測，如PCR定性方法和實時熒光定量PCR方法。隨著轉基因新品種的研究和不斷問世，仍需要深入、擴大開展轉基因食品檢測技術的研究，建立新型、實用、高通量的檢測方法。特別是在對轉基因背景一無所知的情況下，需要提高對各種候選待檢目標逐一篩查檢測的工作效率。

發明內容

本發明的目的是提供一種轉基因小麥和棉花的檢測方法，即使用引物探針組合物來快速檢測小麥、棉花中是否含有外源基因，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種用于小麥和棉花轉基因檢測的引物探針組合物，其中包含有:

檢測內源Wx012基因的引物和探針，其序列分別為SEQ ID NO:1-3；

檢測外源bar基因的引物和探針，序列分別為SEQ ID NO:4-6；

檢測外源nos基因的引物和探針，序列為SEQ ID NO:7-9；

檢測內源Acp1基因的引物和探針，其序列分別為SEQ ID NO:10-12；

檢測外源Mon531基因的引物和探針，其序列分別為SEQ ID NO:13-15；

檢測外源Mon15985基因的引物和探針，其序列分別為SEQ ID NO:16-18；

上述所述各基因特異探針的5′端均修飾有報告基團，3′端均修飾有淬滅基團。

報告基團包含有FAM、FITC、JOE、CY3、CY5、ROX，淬滅基團包含有TAMRA，BHQ、Eclipse等。

上述的引物探針組合物還可以用來制備小麥和棉花轉基因檢測的制品。

本發明再一個方面提供了一種鑒別小麥、棉花轉基因的檢測方法，包括如下的步驟：

1)提取待檢樣本的基因組DNA，

2)將步驟1)提取的基因組DNA加入到鑒別小麥、棉花轉基因檢測的反應體系中，利用六重實時熒光定量PCR法檢測，判讀是否檢出轉基因成分；反應體系中添加了上述的引物和探針組；

3)收集PCR擴增過程中的熒光信號，通過熒光信號鑒別樣本中是否含有外源基因；

上述步驟2)的反應條件如下：95℃3min，1個循環。95℃15s，60℃60s，40個循環。

上述方法中，按以下方式判讀是否檢出轉基因成分：

1)測試樣品中內源基因檢測Ct值小于等于36，外源基因檢測Ct值大于或等于40，判斷該樣品不含所檢外源基因。

2)測試樣品中內源基因檢測Ct值小于等于36，外源基因檢測Ct值小于或等于40，判斷該樣品含所檢外源基因。

3)測試樣品中內源基因檢測Ct值在36～40之間，應調整模板濃度，重做實時熒光PCR，再次擴增后的外源基因Ct值仍小于40，且陰性對照，陽性對照和空白對照結果正常則可判定為該樣品檢出所檢外源基因。若再次擴增后的外源基因Ct值仍大于或等于40，且陰性對照，陽性對照和空白對照結果正常則可判定為該樣品未檢出所檢外源基因。