[發明專利]山茱萸多糖的分離方法及其應用

有效

• 申請號: 201710179626.7
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN106928376B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 李春生
• 申請（專利權）人: 李春生
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61K9/08;A61P1/14;A61P39/06;A61P35/00;A61P37/04;A61P15/00;A61P39/00
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1.分離山茱萸多糖的方法，該方法以山茱萸的成熟果肉為原料，包括如下步驟：

①將原料用水漂洗以除去灰塵；用3~4倍量的水于50~100℃煎煮兩次，每次30~90分鐘，過濾，果渣任選用3~4倍量的熱水洗滌一次，合并兩次濾液和洗液；

②濾液中添加重量/體積百分數為0.15%的氯化鈉和重量/體積百分數為0.02%的冰乙酸，再采用大孔吸附樹脂動態吸附處理，吸附除去脂溶性成份和苦澀性物質，得到口味微甜的流出液，將流出液濃縮成流膏狀濃縮物；

③流膏狀濃縮物進行兩次水溶、醇沉處理，醇沉時使用濃度為70-90%的乙醇，接著將所得沉淀用95%的乙醇洗2次，真空干燥，得到山茱萸多糖。

2.根據權利要求1的方法，其中步驟①所述的水煮溫度為80~100℃，時間為1小時。

3.根據權利要求1的方法，其中步驟②所述大孔吸附樹脂動態處理時，水煮濾液先經樹脂NKA-9動態吸附，再經樹脂X-5動態吸附，去除非多糖的物質。

4.根據權利要求1的方法，其中步驟③所述流膏狀濃縮物進行兩次水溶、醇沉處理，醇沉使乙醇濃度達到80-85%。

5.根據權利要求1的方法，其包括如下步驟：

①取山茱萸干果肉，用水漂洗兩次，除去灰塵，以4倍量的水80～100℃煎煮60分鐘，過濾，收集濾液，以3倍量的水80-100℃煎煮60分鐘，過濾，收集濾液；再以3倍量熱水洗渣一次；合并洗液和兩次煎煮液，過濾，制成澄明濾液；

②澄明濾液中添加重量/體積百分數為0.15%的氯化鈉和重量/體積百分數為0.02%的冰乙酸，再采用大孔吸附樹脂進行動態吸附處理，先以15：1比例大孔吸附樹脂NKA-9動態吸附處理，再以30：1比例的大孔吸附樹脂X-5動態吸附處理；

③流膏狀濃縮物進行兩次水溶、醇沉處理；醇沉時將95%的乙醇往濃縮水溶物里加，邊加邊攪動，使乙醇濃度達到80～85%，靜置后過濾，收集沉淀，再以95%乙醇洗滌沉淀兩次；真空干燥，得到山茱萸多糖。

6.根據權利要求5的方法，其中動態吸附處理時以α-萘酚試劑檢測。

7.權利要求1-6任一項所述方法制得的山茱萸多糖在制備用于產生下列生理功能的產品中的用途：補腎陽、抗皮質激素副作用；抗自由基；抗腫瘤；提高免疫；壯陽，改善性功能；增強生命活力。

8.一種組合物，其是呈口服液或保健飲料或保健酒的形式，該組合物中包括權利要求1-6任一項所述方法制備得到的山茱萸多糖，以及任選的生理學可接受的載體。

9.測試權利要求1-6任一項所述山茱萸多糖中莫諾苷和馬錢苷的含量的方法，該方法包括如下步驟：

照中華人民共和國藥典2015年版四部通則0512所載高效液相色譜法的規范測定；

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.3%磷酸溶液為流動相B，且該磷酸溶液中還包含0.01%酒石酸，按以下規定進行梯度洗脫：0~20分鐘期間流動相A為7%且流動相B為93%，20~50分鐘期間流動相A從7%線性增加到20%且流動相B從93%線性減少到80%；檢測波長為240nm；柱溫為35°C；理論板數按馬錢苷峰計算應不低于10000；

對照品溶液的制備：取莫諾苷對照品、馬錢苷對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得；

山茱萸藥材供試品溶液的制備：取過三號篩的山茱萸藥材粉末0.05g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

山茱萸多糖供試品溶液的制備：取山茱萸多糖0.5g，精密稱定，置10 ml量瓶中，加流動相A與流動相B以體積比20：80的混合液使溶解，定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

測定法：分別精密吸取對照品溶液、山茱萸藥材供試品溶液與山茱萸多糖供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標法以峰面積計算藥材和山茱萸多糖中的莫諾苷和馬錢苷。