[發明專利]檢測甲胎蛋白的單克隆抗體及試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201710179458.1
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN107022030B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 向軍儉;黃建芳;孫一帆;楊少彬
• 申請（專利權）人: 廣東谷盈生物科技產業研究院有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 齊鍵;舒勝英

本發明公開了檢測甲胎蛋白的單克隆抗體及試劑盒和應用。本發明單抗Ab1、Ab3和Ab4這3株單抗均能在人肝癌細胞和肝癌組織中特異性識別人源的天然hAFP，具有很好的特異性。本發明公開了能特異性結合人甲胎蛋白的鼠源性單克隆抗體，該抗體能結合人甲胎蛋白的不同表位，形成雙抗體夾心模式，實現人血清中的甲胎蛋白的定量檢測，對產前診斷及肝癌早期診斷具有一定作用，具有很好的推廣應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及檢測甲胎蛋白的單克隆抗體及試劑盒和應用。

背景技術

人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein，hAFP)是一種由胎兒肝細胞和卵黃囊合成出的胚胎性糖蛋白，其功能與人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)相似，可視其為胎兒發育時期的HSA替代物。正常情況下，hAFP僅存在于胎兒血清中，胎兒出生一年后hAFP濃度可降回正常人水平(5ng/ml)，正常人血清中的濃度一般不高于20ng/ml。當身體發生原發性肝癌時，肝癌細胞可大量分泌hAFP于外周血中，引發血液hAFP濃度的異常升高。

hAFP是最早發現的腫瘤標志物之一，其長期以來被作為肝癌、胎兒缺陷以及胚胎相關癌的重要血清分子標記物，是血液檢驗中的重要評價指標分子。除應用于產前診斷和肝細胞癌診斷外，hAFP的血液檢測對肝損傷、肝硬化、肝炎、腸胃癌、神經管損傷、內胚竇瘤、生殖系統癌癥等疾病的診斷及病情監控也具有重要意義。

中國是個人口大國，產前診斷與每個家庭都息息相關；同時，中國又是一個肝癌高發地區，每年死于肝癌的人數占全世界的40％以上，由于中晚期肝癌基本無有效治療方法，所以對原發性肝癌特異性腫瘤抗原hAFP血液濃度的全民普查和早期診斷是解決肝癌高死亡率問題的最有效措施。因此，提供靈敏、特異、準確、簡便、低成本的血清hAFP檢測方法迎合了社會的迫切需要。

人甲胎蛋白(hAFP)作為原發性肝癌最特異的腫瘤標志物和產前診斷監測分子，其單克隆抗體具有極其重要的實際應用意義。雖然國內外均已成功制備了抗hAFP單抗，但其大多數并不具備臨床應用價值，無法用于試劑盒研發和生產。在國內外現售的hAFP檢測ELISA試劑盒產品中，線性檢測范圍均在20-400ng/ml以內，其中進口試劑盒的整體品質明顯優于國產產品，但其線性范圍和靈敏度仍有待進一步提高。此外，由于血清中成分復雜易出現假陽性，hAFP濃度變化范圍極大(5ng/ml-10mg/ml)，故在實際檢測應用中均采用雙抗體夾心ELISA(DAS-ELISA)兩步法以提高檢測準確度和穩定性，該方法要求用于配對的捕獲抗體和檢測抗體都具有很高的親和力和好的特異性，且形成“抗體1-抗原-抗體2”復合物時空間位置距離越遠配對效果越好，故不斷開發具有更高靈敏度、更好線性檢測范圍的雙抗體夾心配對抗體是試劑盒研發的努力方向，也是臨床檢測的需要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供能特異性結合人甲胎蛋白不同表位的單克隆抗體，并建立雙抗體夾心Elisa方法對人血清中的甲胎蛋白進行檢測。

本發明的目的是提供一組靶向人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein，hAFP)不同表位的鼠源性單克隆抗體，要求抗體能高親和力、高特異性的結合人甲胎蛋白，并形成雙抗體夾心模式，從而能夠對人甲胎蛋白進行定量檢測。

本發明的目的在于提供一種檢測甲胎蛋白的單克隆抗體。

本發明的另一目的在于提供一種檢測甲胎蛋白的試劑盒。

本發明所采取的技術方案是：

一種高特異性高親和力結合人甲胎蛋白的單克隆抗體，該單克隆抗體為Ab1、Ab3或Ab4，單克隆抗體Ab1、Ab3或Ab4的可變區基因均包括重鏈可變區和輕鏈可變區；

所述單克隆抗體Ab1重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；