[發明專利]一種人CYP2C19基因SNP的檢測探針及其應用

在審

• 申請號: 201710176576.7
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN106702019A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 邢江峰
• 申請（專利權）人: 北京一立科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京遞進知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11414
• 代理人: 田豐

技術領域

本發明屬于核苷酸和基因分子檢測領域，具體涉及一種人CYP2C19基因多態性包括CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17位點的檢測探針及其應用。

技術背景

單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)主要是指在基因組水平上由單個核昔酸的變異所引起的DNA序列多態性。在基因組DNA中，任何堿基均有可能發生變異，因此SNP既有可能在基因序列內，也有可能在基因以外的非編碼序列上。位于編碼區內的SNP(coding SNP,cSNP)比較少，從對生物的遺傳性狀的影響上來看，cSNP可分為2種：一種是同義cSNP，即SNP所致的編碼序列的改變并不影響其所翻譯的蛋白質的氨基酸序列，突變堿基與未突變堿基的含義相同；另一種是非同義cSNP，指堿基序列的改變可使以其為模板翻譯的蛋白質序列發生改變，從而影響蛋白質的功能，這種改變常是導致生物性狀改變的直接原因。SNP與許多疾病相關，決定了人類疾病的易感性和藥物反應的差異性。因此，SNP在分析診斷、臨床檢驗、法醫學、病原檢測、遺傳疾病和新藥研發等方面具有重要的應用價值。

CYP2C19基因是人體內一種重要的藥物代謝酶,其對藥物反應起著關鍵性的作用,這是因為CYP2C19基因的活性存在顯著的個體差異,表現為遺傳多態性,從而產生血藥濃度的個體差異,研究其遺傳多態性將為臨床確定最住治療劑量、制定合理用藥方案、發揮最大療效、避免和減少不良反應提供指導依據。在CYP2C19基因中，CYP2C19基因的CYP2C19*2多態性和CYP2C19*3多態性在我國人群中的分布頻率分別為39.9％和6.1％，會使CYP2C19蛋白功能部分喪失，藥物在患者體內代謝障礙蓄積性中毒。而CYP2C19基因的CYP2C19*17多態性在我國人群中的分布頻率為0.7％，其導致CYP2C19蛋白活性增加，藥物在患者體內加速代謝，降低了藥物的治療效果。

目前研究發現，CYP2C19在人體內參與氯吡格雷、S-美芬妥英、奧美拉唑、伏立康唑、安定、去甲安定等藥物的代謝。

氯吡格雷是一種抗血小板藥物，廣泛用于急性冠脈綜合征、缺血性腦血栓、閉塞性脈管炎和動脈硬化及血栓栓塞引起的并發癥。心臟支架手術后的患者需長期服用氯目比格雷以防止支架內再梗。氯吡格雷主要經CYP2C19代謝活化后發揮抗血小板效應。CYP2C19*2和CYP2C19*3突變個體應用常規劑量的氯口比格雷后體內活性代謝物生產減少，對血小板的抑制作用下降。臨床心臟病學會建議，對于CYP2C19代謝障礙患者需考慮改變治療方案。

伏立康唑是一種廣譜三哇類抗真菌藥，CYP2C19是其主要代謝酶之一。CYP2C19加速代謝與代謝障礙個體間伏立康唑的血液濃度存在顯著差異，代謝障礙個體(CYP2C19*2和CYP2C19*3突變)在應用常規劑量藥物時可能出現毒副反應，建議減少用藥劑量；加速代謝(CYP2C19*17突變)和正常代謝個體可給予常規劑量。在常規劑量治療時，若加速代謝個體出現毒副反應或代謝障礙個體療效不佳，均應考慮更換藥物。美國FDA指出個體應用伏立康唑前需檢測CYP2C19基因型，以確保用藥安全。

由上述可見，CYP2C19的活性在在臨床指導用藥上具有非常廣泛的作用，而CYP2C19多態性的檢測凸顯其重要性。目前用于檢測一般采用直接測序或定性PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈式反應)檢測技術檢測CYP2C19基因CYP2C19*2多態性、CYP2C19*3多態性和CYP2C 19*17多態性。直接測序和定性PCR電泳鑒定檢測的靈敏度和特異性均不高，不能準確檢測出CYP2C19基因多態性，不利于預測藥物療效及指導藥物選擇性用藥。另外，直接測序目前大多采用外包實驗，檢測時間過長，一般需要48小時以上，為快速檢測CYP2C19基因多態性帶來不便。因此臨床治療中，迫切需要一種能夠快速檢測CYP2C19多個SNP位點的類型，且不需要測序，特異性高的檢測探針，快速得到準確的SNP結果，知道后續臨床治療。

發明內容