[發明專利]用于檢測FOXL2基因編碼區的PCR引物及反應體系

在審

• 申請號: 201710176061.7
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106801106A
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 周璐
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院整形外科醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 劉書芝

1.用于檢測FOXL2基因編碼區的PCR引物，其特征在于，所述引物包括用于檢測數目可變串聯重復序列的VNTR引物，用于檢測FOXL2基因編碼區全長的擴增引物，用于檢測FOXL2基因編碼區分段長度的擴增引物。

2.根據權利要求1所述的PCR引物，其特征在于，所述用于檢測數目可變串聯重復序列的VNTR引物包括：

FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1)；

FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。

3.根據權利要求1所述的PCR引物，其特征在于，所述用于檢測FOXL2基因編碼區全長的擴增引物包括：

FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3)；

FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4)；

所述用于檢測FOXL2基因編碼區分段長度的擴增引物包括：

FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5)；

FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6)；

或

FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7)；

FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)。

4.檢測FOXL2基因編碼區的PCR體系，其特征在于，所述體系包括用于檢測數目可變串聯重復序列的PCR體系，用于檢測FOXL2基因編碼區全長的PCR體系，用于檢測FOXL2基因編碼區分段長度的PCR體系。

5.根據權利要求4所述的PCR體系，其特征在于，所述用于檢測數目可變串聯重復序列的PCR體系以15μL計為：

10×Buffer I，1.5μL；2.5mM dNTP，1.2μL；5μM熒光引物，0.8μL；TAKARA HS Taq酶，0.1μL；DNA,1.2μL；ddH₂O，9.2μL，總反應體系為15μL。

6.根據權利要求4所述的PCR體系，其特征在于，用于檢測FOXL2基因編碼區全長的PCR體系以20μL計為：

10×Buffer I，2μL；2.5mM dNTP，1.6μL；5μM引物FOXL2-F3，0.6μL；5μM引物FOXL2-R3，0.6μL；Taq Hot Start酶(5U/μL)，0.2μL；DNA,2.0μL；ddH₂O，補齊至20μL；總反應體系為20μL。

7.根據權利要求4所述的PCR體系，其特征在于，用于檢測FOXL2基因編碼區分段長度的PCR體系以50μL計為：

DNA模板，1μL；引物FOXL2-1F，1μL；引物FOXL2-1R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL；

或

DNA模板，1μL；引物FOXL2-2F，1μL；引物FOXL2-2R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL。

8.根據權利要求5所述的檢測數目可變串聯重復序列的PCR體系，其特征在于，PCR反應條件為：

95℃，5min，1個循環；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個循環；最后72℃延伸12min，1個循環,16℃保存。

9.根據權利要求6所述的檢測FOXL2基因編碼區全長的PCR體系，其特征在于，PCR反應條件為：

95℃，5min，1個循環；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個循環；最后72℃延伸12min，1個循環,16℃保存。

10.根據權利要求7所述的檢測FOXL2基因編碼區分段長度的PCR體系，其特征在于，PCR反應條件為：

95℃預變性5min；94℃變性30s；55-60℃退火35s；72℃延伸40-50s；72℃修復延伸5-8min；35個循環。