[發明專利]一種干旱誘導型啟動子、其制備方法、重組表達載體及轉化子

有效

• 申請號: 201710175384.4
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106916818B
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發明（設計）人: 陳利紅;李麗麗;李甜甜;高利芬;周俊飛;彭海
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;C12N1/21
• 代理公司: 11138 北京三高永信知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 徐立

1.一種干旱誘導型啟動子，其特征在于，所述干旱誘導型啟動子的序列如序列表中SEQID NO.1所示。

2.一種制備如權利要求1所述的干旱誘導型啟動子的方法，其特征在于，所述方法包括：

提取二穗短柄草的基因組DNA；

將所述基因組DNA通過如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物進行PCR擴增，得到PCR擴增產物，即所述干旱誘導型啟動子。

3.根據權利要求2所述的制備干旱誘導型啟動子的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系包括：4.8μl ddH₂O、10μl 2×Prime Star GC Buffer、2μl濃度為2.5mM的dNTPmix、1μl濃度為10μM的所述上游引物、1μl濃度為10μM的所述下游引物、0.2μl TakaraPrime Star Taq酶和1μl所述基因組DNA。

4.根據權利要求2所述的制備干旱誘導型啟動子的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：98℃預變性5min；98℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸85s，擴增20個循環，每次循環結束后退火溫度均增加0.5℃；98℃變性30s，65℃退火90s，72℃延伸85s，擴增15個循環；72℃延伸6min。

5.一種干旱誘導型植物的重組表達載體，所述干旱誘導型植物的重組表達載體包括報告基因、選擇標記和終止子，其特征在于，所述干旱誘導型植物的重組表達載體還包括：如序列表中SEQ ID NO.1所示的干旱誘導型啟動子。

6.根據權利要求5所述的干旱誘導型植物的重組表達載體，其特征在于，所述終止子為胭脂堿合成酶終止子。

7.根據權利要求5所述的干旱誘導型植物的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體的選擇標記為潮霉素抗性。

8.根據權利要求5所述的干旱誘導型植物的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體以pCAMBIA1381為骨架載體。

9.根據權利要求5所述的干旱誘導型植物的重組表達載體，其特征在于，所述報告基因為β-葡萄糖苷酸酶基因。

10.一種轉化子，其特征在于，所述轉化子包括如權利要求1所述的干旱誘導型啟動子。